[發明專利]具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料及其制成的局部抗凝血管支架

無效

• 申請號: 201110387895.5
• 申請日: 2011-11-29
• 公開（公告）號: CN102416203A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 周儒倫;郭威早;張建軍
• 申請（專利權）人: 北京中孵友信醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: A61L33/06
• 分類號: A61L33/06;A61L31/08;A61L31/10;A61K48/00;A61P7/02
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

1.具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料，其特征在于：所述涂層材料的有效成分為至少一種RNA干擾重組質粒，所述一種RNA干擾重組質粒指其含有的插入DNA片段能夠表達短鏈干擾RNA，所述短鏈干擾RNA所針對的靶序列為人類環氧化酶1基因PTGS1或人類P2RY12型ADP受體基因的轉錄產物上的一段長度為19nt的序列，所述靶序列的選取方法如下：

(1)靶序列長度基準為19nt；

(2)靶序列的5’端和/或3’端的6個堿基中，鳥嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的數量之和等于或小于4；

(3)同一個靶序列二個相同的拷貝之間，連續配對的堿基不超過4個；

(4)靶序列自身不形成發卡型(hairpin)結構；

(5)如果所針對的基因存在轉錄變異體，則靶序列的選取區域鎖定在該基因的所有轉錄變異體的共同序列部分；

(6)靶序列所在區域不存在已知的最低等位基因頻率超過1％的單核苷酸多態(SNP)；

(7)靶序列與迄今為止已知的人的其它基因序列的連續匹配不超過16nt。

2.根據權利要求1所述的具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料，人類環氧化酶1基因PTGS1的轉錄產物上選取的的靶序列為：

序列(A)：5’-AAGGGTGGGGAGGGGATGG-3’，

序列(B)：5’-TTCTTGCTGTTCCTGCTCC-3’或

序列(C)：5’-TTCACCCACTTCCTGCTCA-3’。

3.根據權利要求1或2所述的具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料，人類P2RY12型ADP受體基因的轉錄產物上選取的靶序列為：

序列(D)：5’-AGACTTTACTGACGAAAAC-3’，

序列(E)：5’-CATCTGTCAAGTCATTTTC-3’或

序列(F)：5’-TACACTCATTACAAAAGAA-3’。

4.根據權利要求1所述的具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料，所述涂層材料還包括涂層轉染緩沖液，所述RNA干擾重組質粒溶于所述涂層轉染緩沖液中，所述涂層轉染緩沖液的配方如下：明膠2％(w/v)，pH7.5的HEPES?20mM，NaCl?120mM，二油酰三甲胺丙烷甲基鹽酸鹽0.01～0.1％(w/v)。

5.根據權利要求4所述的具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料，所述RNA干擾重組質粒溶于涂層轉染緩沖液中，濃度為50ng/ml。

6.用于制備權利要求1～5任一所述的具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料的RNA干擾重組質粒，其針對的靶標序列為：

序列(A)：5’-AAGGGTGGGGAGGGGATGG-3’，

序列(B)：5’-TTCTTGCTGTTCCTGCTCC-3’，

序列(C)：5’-TTCACCCACTTCCTGCTCA-3’，

序列(D)：5’-AGACTTTACTGACGAAAAC-3’，

序列(E)：5’-CATCTGTCAAGTCATTTTC-3’，

或序列(F)：5’-TACACTCATTACAAAAGAA-3’。

7.根據權利要求6所述的RNA干擾重組質粒，克隆載體為CMV質粒。

8.一種局部抗凝血管支架，包括支架本體和支架涂層，其特征在于：所述支架涂層中包含權利要求1～5任一所述的具有局部抗血小板效應的RNA干擾血管支架涂層材料。

9.根據權利要求8所述的局部抗凝血管支架，所述支架涂層還包括由內而外依次為可溶性明膠-多聚氨基甲酸乙酯膠-熱敏性多聚水凝膠-聚異丙基丙烯酰胺凝膠-鮭魚精DNA背景阻滯劑構成的預處理涂層，所述鮭魚精DNA背景阻滯劑的配方為：10mM?pH?8.0的Tris-EDTA，2.0％明膠，5.0μg/ml鮭魚精DNA。