[發明專利]一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基及其應用

有效

• 申請號: 201110385809.7
• 申請日: 2011-11-29
• 公開（公告）號: CN102399704A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 謝君;馮蕾;羅思施;徐曉立;張愛萍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術領域

本發明涉及真菌培養技術領域，具體涉及一種適合白腐真菌生長及產漆酶的液體培養基及其應用。

背景技術

漆酶是一種含銅的多酚氧化酶，其作用底物廣泛，能夠有效降解木質素及催化氧化多種酚和芳胺類化合物，在生物能源、環境保護、造紙工業、食品工業、生物檢測等領域均具有廣闊的應用前景和潛在應用價值。大部分能夠引起木本或草本植物腐化的真菌均能產生漆酶。其中，白腐真菌是一類能夠引起木質白色腐爛的絲狀真菌的統稱，具有突出的木質素降解能力，主要為擔子菌，少部分為子囊菌，包括革蓋菌屬（Coriolus）、臥孔菌屬（Poria）、多孔菌屬（Polyporus）、原毛平革菌屬（Phanerochaete）、側耳屬（Pleurotus）、煙管菌屬（Bjerkandera）和栓菌屬（Trametes）等。

白腐真菌多為好氧微生物，培養溫度一般在28~30℃左右，在pH3.0～8.0的范圍均能穩定產酶。白腐真菌的產酶能力與其培養條件密切相關。碳源、氮源、無機鹽及各類誘導物是提高漆酶產量的關鍵因素。

碳源和氮源對于微生物的生長和代謝是必不可少的。然而，來源不同的微生物對培養基成分的要求有很大差異。對于白腐真菌，常見的碳源有葡萄糖、蔗糖、甘油、玉米粉、麥草粉、麩皮等；常用的氮源為(NH₄)₂SO₄?、NH₄Cl等無機氮源，酵母提取物、蛋白胨等有機氮源以及玉米粉、馬鈴薯、麥麩等天然含氮物質。

此外，許多金屬離子和化合物以不同的方式添加到培養基中，以誘導漆酶基因表達，提高漆酶產量。常見的金屬離子誘導物有Cu²⁺、Mn²⁺等，常見的誘導劑有香蘭素、愈創木酚和丹寧酸等。一些天然的含木質素的物質，如麩皮、麥草粉、木屑木汁、蔗渣等，不僅為培養基提供碳氮源，同時也可用于誘導漆酶的產生。

目前，最常見的用于培養白腐真菌的培養基是新鮮土豆所制成的PDA液體培養，通常于培養基中添加適量的麥麩誘導漆酶產生。然而，于PDA液體培養基中培養白腐真菌，雖然菌體生長快速，但是漆酶產量卻十分低下，不足以用于純化利用。本發明涉及的適合白腐真菌生長和高產漆酶的液體培養基，不僅為菌體生長提供充足的營養成分，還能促進菌體分泌漆酶。與一般的PDA液體培養基相比，同種真菌的漆酶產量可提高5至50倍，足以分離純化并加以利用。

發明內容

本發明的目的在于根據現有技術中存在的上述不足，提供一種不僅適合白腐真菌的生長，還能夠促進白腐真菌分泌漆酶的液體培養基。

本發明另一目的在于提供上述液體培養基的制備方法。

本發明還有一個目的在于提供上述液體培養基的應用。

本發明上述目的通過以下技術方案予以實現：

一種適合白腐真菌生長的液體培養基，由碳源、氮源、大量元素、微量元素和水組成；其中，所述碳源為甘油，所述氮源為酸水解干酪素與麥麩或麥麩水解物的混合；所述大量元素為磷酸氫二銨、磷酸二氫鉀、七水硫酸鎂、琥珀酸鈉、五水硫酸銅、維生素B1和吐溫-80；所述微量元素為氯化鈉、一水硫酸錳、氯化鈣、七水硫酸亞鐵、硫酸鋅、氯化鈷、十二水硫酸鋁鉀、鉬酸鈉和硼酸。

作為一種優選方案，上述液體培養基由如下組分組成：0.001~10%（v/v）甘油，0.001~10%（w/v）酸水解干酵素，0.001~10%麥麩或麥麩水解物，0.01~10g/L磷酸氫二銨，0.01~10g/L磷酸二氫鉀，0.01~10g/L七水硫酸鎂，0.01~10g/L琥珀酸鈉，0.01~10g/L五水硫酸銅，0.001~10g/L維生素B1，0.001~10%?(v/v)吐溫-80，0.0001~0.1g/L氯化鈉，0.0001~0.1g/L一水硫酸錳，0.0001~0.1g/L氯化鈣，0.0001~0.1g/L七水硫酸亞鐵，0.0001~0.1g/L硫酸鋅，0.00001~0.01g/L氯化鈷，0.00001~0.01g/L十二水硫酸鋁鉀，0.00001~0.01g/L鉬酸鈉，?0.00001~0.01g/L硼酸。

本發明上述液體培養基的制備方法是將各組分混合，攪拌均勻，調節pH至2.0~8.0后，分裝滅菌而得。

本發明上述液體培養基可以用于培養白腐真菌，還可以促進白腐真菌分泌漆酶。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：