[發明專利]一種活血化瘀的中藥制劑的檢測方法

有效

• 申請號: 201110385658.5
• 申請日: 2011-11-28
• 公開（公告）號: CN102520081A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 林德良;陳曦
• 申請（專利權）人: 北京漢典制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/31;A61K36/537;A61K9/20;A61P9/10;A61K31/045
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;侯淑紅

1.一種活血化瘀的中藥制劑的檢測方法，該檢測方法包括采用液相色譜法測定所述中藥制劑，其中，所述液相色譜的條件包括：

采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；

采用以乙腈為流動相A，以0.1％甲酸溶液(V/V)為流動相B進行梯度洗脫。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述梯度洗脫的程序為：

0～15分鐘，流動相A∶流動相B＝20％-40％∶80％-60％；

15～17分鐘，流動相A∶流動相B＝40％-60％∶60％-40％；

17～35分鐘，流動相A∶流動相B＝60％-100％∶40％-0％；

35～37分鐘，流動相A∶100％。

3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜的條件還包括：檢測波長為250nm-390nm，優選為250nm；柱溫為25℃-35℃，優選為30-35℃，更優選為35℃；流速為0.6-1mL/min，優選為1mL/min。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的檢測方法，其特征在于，采用液相色譜法測定所述中藥制劑包括：

取所述中藥制劑，研細，精密稱定1.0250g細粉，加入50mL具塞錐形瓶中，加甲醇25ml，稱重，超聲處理15min，放冷，稱重，用甲醇補足損失，搖勻，濾過，取續濾液，得到濃度為41mg/mL的樣品溶液，然后采用如下液相色譜條件進行測定：

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，柱長為200mm，柱內徑為4.6mm的Kromasil色譜柱；

以乙腈為流動相A，以0.1％甲酸溶液(V/V)為流動相B進行梯度洗脫，梯度洗脫的程序為：0～15分鐘，流動相A∶流動相B＝20％-40％∶80％-60％；15～17分鐘，流動相A∶流動相B＝40％-60％∶60％-40％；17～35分鐘，流動相A∶流動相B＝60％-100％∶40％-0％；35～37分鐘，使用流動相A；

檢測波長為250nm；

柱溫為35℃；

流速為1mL/min。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括：

(1)將所述中藥制劑制備成濃度為25-100mg/mL的藥液，然后與富血小板血漿以體積比為1∶5-10，優選為1∶8.3相混合，測定該混合液在600nm處的吸光度值；

(2)加入體積為所述藥液2-4倍，優選為2倍量的濃度為10％(g/ml)的膠原，測定加入膠原后混合液在600nm處的吸光度值；

(3)按以下公式計算血小板聚集率和藥物對血小板聚集抑制率：

血小板聚集率＝(加入膠原前吸光度值-加入膠原后吸光度值)/加入膠原前吸光度值

藥物對血小板聚集抑制率＝(空白組血小板聚集率-給藥組血小板聚集率)/空白組血小板聚集率。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括：

(1)將富血小板血漿移入硅化比色杯中在37℃下溫育5min，用貧血小板血漿調零，測其在600nm處吸光度值，然后用所述貧血小板血漿調節所述富血小板血漿的吸光度值在0.5-0.7之間，將2.5mL調好的富血小板血漿放入比色杯中，加入濃度為25-100mg/mL的所述中藥制劑的藥液0.3mL，同時調零管中加入相應濃度的所述中藥制劑的藥液調零，作用3min后，測吸光度值；

(2)加入10％(g/ml)濃度的膠原0.6mL，同時調零管中加入相同體積的生理鹽水，分別測定加入膠原后600nm處的吸光度值；

(3)按以下公式計算血小板聚集率和藥物對血小板聚集抑制率：

血小板聚集率＝(加入膠原前吸光度值-加入膠原后吸光度值)/加入膠原前吸光度值

藥物對血小板聚集抑制率＝(空白組血小板聚集率-給藥組血小板聚集率)/空白組血小板聚集率。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述中藥制劑由丹參、三七和冰片為原料制備而成，以重量百分比計，丹參為70-85％，優選為75.13％；三七為15-25％，優選為23.54％；冰片為0.8-1.5％，優選為1.33％。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述中藥制劑由丹參、三七和冰片為原料制備而成，其配比如下：丹參450g，三七141g，冰片8g。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述中藥制劑的制備方法如下：

以上三味，丹參加5倍乙醇加熱回流1.5小時，提取液濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量，備用；藥渣加50％乙醇5倍，加熱回流1.5小時，提取液濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量，備用；藥渣加水12倍，煎煮2小時，煎液濾過，濾液濃縮至適量，備用；

三七粉碎成細粉，與上述濃縮液和適量的輔料制成顆粒，干燥；或將上述提取液合并，濃縮至50℃下相對密度為1.28-1.30，真空干燥，粉碎，加入過100目篩的三七細粉，加入，混勻，以85％乙醇制成顆粒，干燥；冰片研細，與0.2重量％硬脂酸鎂、5重量％羧甲基淀粉鈉及上述顆粒混勻，壓片，即得。