[發(fā)明專利]硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110384989.7
• 申請日: 2011-11-29
• 公開（公告）號: CN102532585A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳玉云;徐寧;許國華;葉曉健;鐘建;何丹農(nóng)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司;上海長征醫(yī)院
• 主分類號: C08J9/40
• 分類號: C08J9/40;C08J3/24;A61L27/24;A61L27/20;A61L27/12;A61L27/56
• 代理公司: 上海上大專利事務(wù)所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

1.一種硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為：

(1).將膠原蛋白Col溶于醋酸溶液中，4℃下配制成濃度為：1%～1.5%g/L的Col溶液，并調(diào)節(jié)pH值至中性；用超純水溶解硫酸軟骨素CS制成濃度為：1%～1.5%g/L的CS溶液；

(2)按Col溶液與CS溶液的體積比為5:1～9:1的比例，在4℃攪拌下，將CS溶液緩慢滴加到Col溶液中；

(3)向步驟(2)得到的溶液中加入可溶性鈣鹽溶液和磷酸鹽溶液，其中鈣磷的計量比為1.67：1，并控制Co與羥基磷灰石的質(zhì)量比為1:9～3:7，緩慢加熱到40℃，并攪拌20分鐘；調(diào)節(jié)pH值為7，出現(xiàn)白色懸濁液，持續(xù)攪拌24小時；

(4)將步驟(3)所得的沉淀物清洗并離心，干燥，得到硫酸軟骨素-膠原蛋白/羥基磷灰石粉末；

(5)將步驟(4)得到粉末和羧甲基纖維素按100:0.2～2的質(zhì)量比與雙氧水溶液進行調(diào)和至粘稠狀后攪拌30分鐘發(fā)泡，得到漿料；

(6)將步驟(5)所得到的漿料快速移入12孔細胞培養(yǎng)平板，并立即放入-20?℃?冰箱預(yù)冷凍24h；取出，于-50?℃?冷凍干燥，得到硫酸軟骨素-膠原蛋白/羥基磷灰石多孔支架材料；

(7)將步驟(6)所得到的多孔支架浸泡于50mmol/L的2-嗎啉乙烷磺酸0MES的40%乙醇溶液30min；取出，再浸泡于50mmol/L的?2-嗎啉乙烷磺酸MES、20mmol/L的碳化二亞胺?EDC、5mmol/L?的琥珀酰胺NHS的40%乙醇溶液24h；得到交聯(lián)材料；

(8)將步驟(7)所得交聯(lián)材料在依次在0.1?mol/L?Na₂HPO₄溶液、1mol/L的?NaCl溶液以及2mol/L?NaCl溶液中清洗，用超清洗10次，冷凍干燥，就得到硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石多孔支架材料。

2.根據(jù)權(quán)利要求所述的硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備方法，其特征在于所述的步驟（2）中的滴加速度控制在0.5ml/min～1.0?ml/min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備方法，其特征在于所述的可溶性鈣鹽為硝酸鈣或氯化鈣。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備方法，其特征在于所述的磷酸鹽為磷酸氫二鈉、磷酸氫二銨或磷酸氫銨。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫酸軟骨素交聯(lián)膠原蛋白/羥基磷灰石復(fù)合支架材料的制備方法，其特征在于所述的雙氧水溶液的質(zhì)量百分比濃度為3-7%。