[發明專利]檢測結腸腺癌相關基因啟動子甲基化引物

有效

• 申請號: 201110383433.6
• 申請日: 2011-11-28
• 公開（公告）號: CN102373286A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 王樹;楊瓊;吳蔚
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種生物技術領域，尤其涉及一系列檢測結腸腺癌相關基因啟動子甲基化引物。

背景技術

腫瘤相關特異基因的啟動子CpG區域的甲基化修飾與腫瘤發生和形成相關。值得關注的是，不同類型的腫瘤以及同一腫瘤的不同病理分型和分級，會發生特異的基因甲基化修飾，因此，腫瘤相關基因的甲基化狀態已經成為一類重要的腫瘤檢測標志物，可用于腫瘤早期檢測、腫瘤預后評價和藥物敏感性預測和評價。

共軛聚合物為基礎的熒光共振能量轉移技術(Cationic?conjugated?polymer-basedfluorescence?resonance?energy?transfer，CCP-FRET)能提高檢測的敏感性和特異性，將這個技術應用于甲基化半定量分析，具有高效、成本低廉、操作簡單、無需標記技術和特殊設備優點。而傳統的DNA測序方法操作繁瑣，敏感性較低；Real?time?PCR盡管具有較高的敏感性，但是它的成本較高，此外，對檢測儀器的需求也限制了其在臨床的實際應用。因此，CCP-FRET方法有希望成為臨床常規檢測方法。

發明內容

本發明的一個目的是提供檢測待測DNA甲基化的引物。

本發明提供的引物，為如下1)或2)：

1)所示的引物由引物對A-引物對F組成；

所述引物對A由引物1和引物2組成；

所述引物對B由引物3和引物4組成；

所述引物對C由引物5和引物6組成；

所述引物對D由引物7和引物8組成；

所述引物對E由引物9和引物10組成；

所述引物對F由引物11和引物12組成；

所述引物1-引物12的核苷酸序列依次分別為序列表中的序列1-12；

2)所示的引物為所述引物對A-引物對F中的至少一種。

上述引物對A用于檢測VIM基因的甲基化；所述引物對A具體用于檢測VIM基因CpG位點的甲基化；

上述引物對B用于檢測MGMT基因的甲基化；所述引物對B具體用于檢測MGMT基因CpG位點的甲基化；

上述引物對C用于檢測TMEFF2或HPP1基因的甲基化；所述引物對C具體用于檢測TMEFF2或HPP1基因CpG位點的甲基化；

上述引物對D用于檢測ESR1基因的甲基化；所述引物對D具體用于檢測ESR1基因CpG位點的甲基化；

上述引物對E用于檢測APC基因的甲基化；所述引物對E具體用于檢測APC基因CpG位點的甲基化；

上述引物對F用于檢測MLH1基因的甲基化；所述引物對F具體用于檢測MLH1基因CpG位點的甲基化。

上述的CpG位點為CCGG；上述各引物均獨立包裝。

本發明的另一個目的是提供一種檢測待測DNA的甲基化的PCR試劑。

本發明提供的PCR試劑，為如下1)或2)：

1)所示的PCR試劑包括PCR試劑A1-PCR試劑F1；

所述PCR試劑A1由所述引物對A、dNTPs、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶組成；

所述PCR試劑B1由所述引物對B、dNTPs、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶組成；

所述PCR試劑C1由所述引物對C、dNTPs、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶組成；

所述PCR試劑D1由所述引物對D、dNTPs、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶組成；

所述PCR試劑E1由所述引物對E、dNTPs、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶組成；

所述PCR試劑F1由所述引物對F、dNTPs、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶組成；

2)所示的PCR試劑包括PCR試劑A1-F1中的至少一種。

1)所示的PCR試劑還包括PCR試劑A2-PCR試劑F2；

2)所示的PCR試劑還包括PCR試劑A2-PCR試劑F2中的至少一種；

所述PCR試劑A2-PCR試劑F2為將所述PCR試劑A1-PCR試劑F1中的dNTPs替換為dNTPs’；

所述dNTPs’由熒光素標記的dATP、熒光素標記的dGTP、dATP、dCTP和dTTP組成。

1)所示的PCR試劑由PCR試劑A1-F1和PCR試劑A2-F2組成；

2)所示的PCR試劑由PCR試劑A1-F1中至少一種和與其對應的PCR試劑A2-F2中至少一種組成；

所述熒光素為購于中國同位素公司。