[發明專利]一種擬穴青蟹ETFB基因及其克隆、檢測方法和應用

無效

• 申請號: 201110382739.X
• 申請日: 2011-11-25
• 公開（公告）號: CN102477429A
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: 王日昕;姚海富;徐田軍;程遠志
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435;C12Q1/68
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

技術領域

本發明涉及蟹類主要代謝器官中表達的基因序列，更具體涉及一種擬穴青蟹電子轉移黃素蛋白β亞基基因ETFB的核苷酸序列、氨基酸序列及其克隆方法、檢測方法和應用。

背景技術

黃素蛋白是一類以黃素核苷酸作為輔酶或輔基、參與線粒體呼吸鏈的組成，通過輔酶或輔基可接受和提供兩個質子和兩個電子，起到氧化還原酶或電子傳遞體的作用。電子轉移黃素蛋白（Electron?Transfer?Flavoprotein，ETF）是一類以黃素腺嘌呤二核苷酸（flavin?adenine?dinucleotide，FAD）為輔酶的蛋白質。目前ETF已經成功地從哺乳動物如人、鼠和豬中，以及一些細菌中如脫氮副球菌、埃氏巨球形菌和食甲基嗜甲基菌中鑒定出來。在這些生物中，ETF是由30KDa的α亞基和28KDa的β亞基構成異源二聚體，每個亞基包含一個黃素腺嘌呤二核苷酸（flavin?adenine?dinucleotide，FAD）和一個腺苷一磷酸（Adenosine?Monophosphate，AMP）。ETF是線粒體和細菌異化途徑及呼吸鏈中至少11種脫氫酶的重要電子傳遞體，典型途徑為通過ETF-泛醌氧化還原酶將電子從最初的脫氫酶轉移至泛醌，以保證電子傳遞鏈持續運轉產生質子勢能。

蟹類生長所需的能量代謝受多種內外因素的調節，歸根結底，它是受到相關基因的控制調節。在有關哺乳類研究中表明：ETF為核基因組編碼，在細胞質內合成后再轉移至線粒體加工處理為成熟肽，通過ETF-泛醌氧化還原酶將電子轉移至泛醌，使得多種一級脫氫酶和泛醌-細胞色素C發生聯系，從而保證電子傳遞鏈的運轉生成生命活動的所需能量。在細菌中的研究也發現類似的機制。在蟹類中，目前還沒有鑒定出電子傳遞黃素蛋白基因，如能找到呼吸鏈中聯系電子轉移和脫氫酶中的基因，則可以通過多種研究手段，如RNA干擾（RNAi），基因過表達，啟動子分析，真核表達與具生物活性蛋白質分離純化，體外生化功能分析，從而為闡明蟹類ETFB基因在電子傳遞機制和能量代謝的功能及其發生機制奠定理論基礎。

發明內容

本發明旨在提供一種通過5’-RACE和3’-RACE技術克隆得到擬穴青蟹ETFB基因，還提供了所述ETFB基因的克隆方法、檢測方法和應用。

為實現本發明的發明目的，發明人提供如下技術方案：

一種擬穴青蟹ETFB基因，具有如SEQ?ID?No.?1所示的核苷酸序列。

一種擬穴青蟹ETFB基因，它編碼的蛋白質具有如SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列。

本發明所述的擬穴青蟹電子轉移黃素蛋白β亞基基因（即擬穴青蟹ETFB基因）是從擬穴青蟹的肝胰臟中鑒定出的一種電子轉移黃素蛋白β亞基基因。所述的電子轉移黃素蛋白β亞基基因是通過5’-RACE和3’-RACE技術克隆得到的一個基因，其cDNA核苷酸序列和編碼的蛋白質序列如下。該基因cDNA全長1030bp，自18bp到782bp區段為其開放閱讀框，編碼254個氨基酸，5’端非編碼區長17bp，3’端非編碼區長248bp，包含1個mRNA半衰調節基序（ATTTA），多聚腺苷酸加尾信號AATAAA和多聚腺苷酸尾巴。在GenBank中進行Blast同源性測定，確定該cDNA編碼電子轉移黃素蛋白β亞基基因。

擬穴青蟹電子轉移黃素蛋白β亞基基因ETFB核苷酸序列如下（SEQ?ID?NO.1）：