[發明專利]一種4-氨基偶氮苯完全抗原及其制備方法無效

申請號：	201110381174.3	申請日：	2011-11-26
公開（公告）號：	CN102391373A	公開（公告）日：	2012-03-28
發明（設計）人：	王術皓;龐玉波;宋于燕;張霞	申請（專利權）人：	聊城大學
主分類號：	C07K14/765	分類號：	C07K14/765;C07K1/113
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種氨基偶氮完全抗原及其制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于小分子有機物的免疫化學生物技術領域，具體涉及一種4-氨基偶氮苯完全抗原及其制備方法。

背景技術

????偶氮染料是指染料分子結構中含有偶氮基（-N=N-）的染料，這類染料具有色譜齊全、顏色鮮艷、色牢度較高、成本低等優點，被廣泛應用在紡織品印染行業。但相關研究表明，部分偶氮染料與人體作用后能夠產生多種芳香胺類物質，經人體的活化作用后會使細胞的DNA結構和功能發生改變，從而誘發細胞癌變或畸變等病變，對人體具有致癌性。因此，歐盟在2003年9月11日公布的第2002?/61號令中規定：凡是在還原條件下釋放出致癌芳香胺的偶氮染料都禁止使用。

4-氨基偶氮苯（4-Aminoazobenzene，簡稱4-AAB）是目前國際上明令禁止使用的24種芳香胺中的一種。2009年，我國頒布了GB/T23344-2009《紡織品4-氨基偶氮苯的測定》標準。標準大部分內容參考了國外的相關標準。盡管新標準的頒布彌補了4-氨基偶氮苯檢測方法的空白，但仍有一些不足，如標準中先還原后萃取的方法回收率低，依靠叔丁基甲醚的萃取效果不夠理想。另外，常用的檢測方法多是采用GC-MS、HPLC等色譜法分離檢測。此類方法過程復雜、效率低，對色譜柱污染嚴重。所以建立簡單、快速的4-氨基偶氮苯檢測方法，具有重要的意義。

免疫分析是利用抗原和抗體的特異性結合作用來選擇性識別和測定可以作為抗體或抗原的待測物。免疫分析法具備有效的靈敏度、特異性、快速和低成本的優點；可對大量的樣品進行常規分析；能夠用于樣品的定性篩選，也能夠對樣品進行定量測定以確定樣品中待測組分的含量。近年來免疫分析得到了環境科學、食品科學界得極大關注。因此研究建立4-氨基偶氮苯的免疫分析方法，將會提供其更為簡單、有效的檢測手段。

4-氨基偶氮苯的相對分子質量較小，為不能直接引發免疫反應的半抗原，必須和大分子的載體蛋白，如牛血清白蛋白（bovine?serum?albumin,?BSA）、卵清白蛋白（ovalbumin,?OVA）等偶聯之后構成完全人工抗原，才能應用于免疫操作。因此，有必要制備4-氨基偶氮苯人工抗原，用于免疫檢測。

申請公布號CN?101899109?A（申請號201010215515.5）的中國專利文獻提供了一種4-氨基偶氮苯人工抗原的合成方法，是以4-氨基偶氮苯為半抗原，用重氮化法將其與載體蛋白BSA偶聯。其缺點是反應條件較為苛刻，要求在冰水浴中反應并且沒有引入連接臂。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種4-氨基偶氮苯完全抗原及其制備方法。該方法具有重復性好，步驟少和反應條件溫和的特點，此外還引入了連接臂，為進一步提取免疫分析所需要的抗4-氨基偶氮苯抗體奠定了良好的基礎。

本發明的方案是：一種4-氨基偶氮苯完全抗原，結構式如下：

。

所述4-氨基偶氮苯完全抗原的制備方法，步驟如下：

（1）將一定pH值的磷酸鹽緩沖溶液和1,4-二氧六環按一定體積比混合，得到混合液備用；

（2）用占1/5體積的混合液溶解一定量的4-氨基偶氮苯；

（3）用占3/10體積的混合液稀釋一定量的戊二醛溶液；

（4）將步驟（2）所述的4-氨基偶氮苯溶液逐滴滴加到步驟（3）所述的戊二醛溶液中，室溫下攪拌反應一定的時間，得到中間產物；

（5）在圓底燒瓶中，用占1/2體積的混合液溶解BSA，得到10mg/mL的BSA溶液，并將步驟（4）得到的中間產物溶液逐滴滴加入到圓底燒瓶中，室溫下攪拌反應一定的時間，得到4-氨基偶氮苯的完全抗原溶液，透析，計算結合比。

前面所述的制備方法，優選的方案是，所述緩沖溶液具體為pH=6.0-8.5的磷酸鹽緩沖溶液（PBS），優選pH=7.4的PBS。