[發明專利]一種利用魔芋粉誘導生產殼聚糖酶的方法

無效

• 申請號: 201110380131.3
• 申請日: 2011-11-22
• 公開（公告）號: CN102399727A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 康立新;馬立新
• 申請（專利權）人: 湖北大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;C12R1/125
• 代理公司: 武漢金堂專利事務所 42212
• 代理人: 丁齊旭

1.所用殼聚糖酶生產菌株為枯草芽孢桿菌Bacillus?subtiiis?HD145，來源于中國典型培養物保藏中心，其保藏號為CCTCC?No.AB?2010353。

2.一種利用魔芋粉誘導生產殼聚糖酶的方法，其特征在于步驟為：

(1)將權利要求1所述的CCTCC?NO：AB?2010353號枯草芽孢桿菌37℃活化24h，接種于誘導培養基中，誘導培養基的配方由7％～14％60-80目魔芋粉和LB液體培養基組成(w/v)，接種量為2％，誘導溫度31℃～37℃，pH為5.5～9.0，在搖床200rpm條件下進行誘導36～54h，測定殼聚糖酶活性；

(2)誘導完成后，將培養液于4℃、10,000rpm離心10min，收集上清，得粗酶液；

(3)殼聚糖酶水解殼聚糖

稀釋100倍后的殼聚糖酶粗酶液100ul與濃度2％的膠體殼聚糖底物，于40℃條件下反應30-60min，加入一定量的DNS，煮沸5-10分鐘，10,000rpm離心10min，去除不溶性物質，收集上清于波長540nm下測定吸光指，換算出酶活性大小，結果魔芋粉誘導條件下產殼聚糖酶活性為11762U/ml，而不含誘導物的對照中活性為221U/ml，魔芋粉誘導產酶活性提高了53倍。

3.按權利要求2所述的一種利用魔芋粉誘導生產殼聚糖酶的方法，其特征在于步驟中最佳工藝條件為：誘導培養基的配方由12％60-80目魔芋粉和LB液體培養基組成(w/v)，接種量為2％，誘導溫度34℃，pH為6.5，在搖床200rpm條件下進行誘導42h。