[發明專利]一株高產褐藻酸裂解酶的嗜鹽白蟻菌及其應用方法

有效

• 申請號: 201110379770.8
• 申請日: 2011-11-08
• 公開（公告）號: CN102433274A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 史勁松;許正宏;魏丹;張曉梅;許鴻瑜;竇文芳;陸震明;錢建瑛;張旦旦;李恒;李會;耿燕
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/88;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一株高產褐藻酸裂解酶的嗜鹽白蟻菌(Isoptericola?halotolerans)及其應用方法。

背景技術

褐藻寡糖具有多種生物活性，其藥用價值的研究已成為新的熱點，具有良好的抗腫瘤活性和抗凝活性，副作用小，可降血糖血脂，并且對人的遺傳性高血糖也有明顯療效，同時可以防止高膽固醇血癥的形成，有降脂、維護心血管正常功能的作用。目前，生產褐藻寡糖的方法可歸納為：化學降解法、物理降解法和酶解法。但前兩者降解速度慢，會破壞多糖的特有的結構，且需高溫、高壓，條件復雜不易控制，而酶解法條件溫和，得率高達100％，因此在褐藻寡糖的生產方面倍受到重視，使得后者的醫藥作用充分得到實現。此外，褐藻酸裂解酶作為一個重要的海洋生物酶，可以配合一些抗生素降解肺囊性纖維化病人肺中綠膿桿菌產生的褐藻膠，抑制綠膿桿菌的生長繁殖，也可作為海藻解壁酶從褐藻或紅藻中分離DNA、原生質體和單胞藻，為新藥、新功能食品的開發提供新的手段。依靠富集褐藻附生菌篩選產酶菌株是我國現階段獲得褐藻酸裂解酶的主要手段。微生物褐藻酸裂解酶主要來源于海洋細菌、真菌等，但是由于受到海洋特殊生長環境的影響，這些褐藻酸降解菌種的產酶性狀不穩定。因此，尋找性狀穩定、易于培養的高產的褐藻酸裂解酶菌株具有重要意義。而相關研究，國內外尚未文獻報道。

發明內容

本發明的目的在于針對現有褐藻酸裂解酶的生產方法中的技術難點及存在的問題，提供一株新型的高產褐藻酸裂解酶的嗜鹽白蟻菌，利用該菌株發酵可生產高酶活力的褐藻酸裂解酶，該菌株是極具有開發研究價值的褐藻酸裂解酶的生產菌株。

發明內容

本發明的發明人從國內生產褐藻酸鈉的化工廠取得土樣與廢料樣品，分離篩選獲得一株產褐藻酸裂解酶的新型嗜鹽白蟻菌WX，并對這株菌進行了發酵研究。根據形態特征和生理生化特性，將其鑒定為Isoptericola?halotolerans，編號為WX。該菌于2011年10月12日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.5336。

本發明提供的嗜鹽白蟻菌WX的形態特征與生理生化特征為：

該菌株形態呈短桿狀，或似球形，革蘭氏染色陽性；在平板上培養48h的菌落呈淺黃色，圓形微凸、表面光滑、菌苔濕潤、菌落較小，但透明圈明顯；單個、成對或短鏈狀排列，無鞭毛，無孢子形成。最適溫度為25℃，最適pH為8.0。可在20％的NaCl、pH為10的培養基中生長。接觸酶呈陽性，氧化酶呈陰性，M.R、V.P反應為陰性，可利用葡萄糖、乳糖、甘露醇等，不能利用果糖、甘油等；不能水解淀粉，但可以緩慢水解明膠；具有硝酸鹽還原性，可水解纖維素。生理生化特征見表1

表1

本發明提供的嗜鹽白蟻菌WX是具有良好前景的產褐藻酸裂解酶的新型生產菌株，該菌株可在自制培養基中生長。自制培養基配方為：褐藻酸鈉6g/L，蛋白胨5-20g/L，酵母粉4-10g/L，NaCl?20-30g/L，MgSO₄?2mM，CaCl₂?0.5mM，KH₂PO₄?1mM，FeSO₄?0.2mM，MnSO₄?0.3mM，瓊脂粉10-20g/L；補充蒸餾水至1L，滅菌前調培養基的pH至7.5-8.0，在121℃高壓蒸汽下滅菌20min。

上述的嗜鹽白蟻菌WX可以采用發酵法生產褐藻酸裂解酶，其步驟如下：

1)采用保藏號為CGMCC?No.5336的嗜鹽白蟻菌WX為生產菌種，按照常規方法進行活化培養得到種子液，將該種子液涂布到自制培養基上；

2)制備的嗜鹽白蟻菌WX菌株的細胞液體培養物：挑取步驟(1)的自制培養基上的嗜鹽白蟻菌WX一環，接種于裝有20-50mL培養基的250mL錐形瓶中，培養溫度為25-30℃，置搖床上以180-230r/min的轉速培養20-24h至對數生長中期，即得到嗜鹽白蟻菌WX菌株的細胞液體培養物；