[發明專利]抑制PAR-1基因表達的siRNA及其應用

有效

• 申請號: 201110377138.X
• 申請日: 2010-01-22
• 公開（公告）號: CN102382833A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 潘振華;張紅;盛青松
• 申請（專利權）人: 無錫奧瑞生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P1/16
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 曹祖良

技術領域

本發明涉及抑制PAR-1(蛋白酶激活受體-1)基因表達的siRNA(小分子干擾RNA)及其應用。

背景技術

幾乎所有肝病均具有炎癥壞死，而只要有炎癥壞死，肝纖維化即發生。肝纖維化的不斷發展，引起肝小葉結構改建和假小葉形成，導致肝硬化；纖維組織壓迫血管，引起門脈高壓和肝缺血，進而加劇肝細胞壞死和炎癥，如此形成惡性循環。因此，阻斷肝纖維化的發生和發展，對防治肝硬化具有重要意義。而且我國肝病發病率是比較高的國家之一，所以尋找有效途徑抑制肝纖維化，有相當重要的意義。

肝纖維化和它導致的最后階段的肝硬化，通常是由病毒感染，過度使用損害肝臟的藥物，代謝系統疾病，和遺傳因素引起的。肝纖維化的病理進程，實際上是正常的肝組織被疤痕類似的膠原蛋白代替，導致肝功能的喪失，過去認為這個過程是一個不可逆的過程，直到最近才認為這個過程在早期是可以挽救的。根據目前的研究，表明星狀細胞在這個過程中起了關鍵作用。正常的肝臟中，星狀細胞大約占肝體積的1.4％，相當于每100個肝細胞中大約有3.6-6個星狀細胞。纖維化的過程實際上是來自于門靜脈和竇周的α平滑肌細胞骨架陽性的肌纖維母細胞產生和增殖的過程。雖然這種細胞有不止一種的潛在來源，但被研究的最為清楚的就是肝星狀細胞，在它們沒有被活化成α平滑肌細胞骨架陽性表型的細胞之前，它們的主要功能是貯存維生素A，調節維甲酸的水平。可一旦被活化后，它們就成為肝纖維化中纖維膠原的主要來源，而且它們通過收縮和釋放致炎和致纖維因子，潛在的調節竇間隙的血流量。活化的星狀細胞還能產生基質金屬蛋白酶組織抑制劑，導致基質金屬蛋白酶降解肝細胞外基質的功能受損，從而使細胞外基質向膠原和纖維化轉變。

隨著RNAi作為制藥技術的成熟，已有siRNA藥物進入臨床實驗，siRNA藥物具有如下優點：(1)、特異性強，堿基的順序決定了它的特異性；(2)、設計便利，由于人類基因庫已經完成，這為siRNA的設計帶來了極大的便利，可以說幾乎沒有基因不能作為siRNA的靶標；(3)、臨床研究便利，siRNA藥物作為核酸類藥物，不管何種siRNA都具有大致相同的藥物代謝，藥物分布，藥物毒性，這為進入臨床研究帶來了極大的便利；(4)、由于RNAi一開始就已將特定基因作為靶標，所以siRNA分子藥理學明確。

發明內容

本發明的目的在于利用RNAi(RNA干擾)技術，對候選的靶標基因進行效用、量效關系及特異性的評定，以提供能夠抑制PAR-1(蛋白酶激活受體-1)基因表達的siRNA(小分子干擾RNA)，并進一步地提供該siRNA在臨床上的應用。

按照本發明提供的技術方案，所述siRNA為下述PAR-1-01～PAR-1-08中的任意一種，PAR-1-01～PAR-1-08分別為：

PAR-1-01：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.1為5′-AGGGCAGUCUACUUAAAUA-3′

反義鏈序列SEQ?ID?NO.2為5’-UAUUUAAGUAGACUGCCCU-3’

PAR-1-02：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.3為5′-CGGCCGUGGUGUACAUGCU-3′

反義鏈序列SEQ?ID?NO.4為5′-AGCAUGUACACCACGGCCG-3′

PAR-1-03：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.5為5′-CCUUCAAGAUCAGCUACUA-3′

反義鏈序列SEQ?ID?NO.6為5′-UAGUAGCUGAUCUUGAAGG-3′

PAR-1-04：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.7為5′-ACAUGUACGCCUCCAUCAU-3′

反義鏈序列SEQ?ID?NO.8為5′-AUGAUGGAGGCGUACAUGU-3′

PAR-1-05：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.9為5′-GCAUCUUCAUCGUCUGCUU-3′

反義鏈序列SEQ?ID?NO.10為5′-AAGCAGACGAUGAAGAUGC-3′

PAR-1-06：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.11為5′-CCACCAACGUCCUCCUGAU-3′

反義鏈序列SEQ?ID?NO.12為5′-AUCAGGAGGACGUUGGUGG-3′

PAR-1-07：

正義鏈序列SEQ?ID?NO.13為5′-GCAGGGCAGUCUACUUAAA-3′