[發明專利]甲基化FBP1基因的應用

無效

• 申請號: 201110375454.3
• 申請日: 2011-11-23
• 公開（公告）號: CN102409096A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 金洪傳;王嫻;劉昕;王發亮
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 王江成

技術領域

本發明涉及醫藥生物技術領域，具體是新抑癌基因FBP1基因DNA甲基化在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用。

背景技術

胃癌是常見腫瘤之一。有報告顯示，如果胃癌僅限于胃壁的粘膜層，5?年的生存率可達95%。然而，目前很少有胃癌患者能夠在早期被發現，導致5年生存率在20%左右。因此早檢查、早治療是降低胃癌死亡率的最關鍵手段。

隨著胃癌發病機理研究的深入，已發現多種基因異常。這些基因的改變決定著胃癌的生物學和臨床行為，對這些改變的檢測對于胃癌早期診斷具有重要意義，而使這些異常回復正常將是胃癌治療的重要方向之一。

基因的表觀遺傳學改變是腫瘤發生的重要原因，包括DNA甲基化的丟失、獲得、以及組蛋白修飾為特征的染色質結構的變化等。這些表觀遺傳的改變，特別是抑癌基因啟動子的超甲基化引起的基因沉默，影響著腫瘤發展的各個階段。因此，抑癌基因啟動子超甲基化水平可以作為腫瘤診斷和預后的分子標記，而抑制抑癌基因啟動子甲基化或使已甲基化的抑癌基因啟動子去甲基化將對腫瘤的預防、治療具有重要意義。

果糖-1,6-二磷酸作為糖酵解途徑中重要的反應中間體受到果糖-6-磷酸酶和果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose-1,6-bisphosphatase,?FBP）的雙重調控。已有研究表明，腫瘤細胞中果糖-6-磷酸酶水平發生上調，但FBP基因僅以在腫瘤細胞中是否也發生變化以及其對腫瘤發生、發展的作用，至今還不清楚。在哺乳動物細胞中存在兩種FBP基因的同工酶，其中FBP2基因只存在于肌肉中，而FBP1基因分布更為廣泛。

隨著分子生物學的進展，越來越多的抑癌基因被發現和鑒定，不僅拓展了我們對腫瘤發生的認識，也為腫瘤診治手段的開發提供了更多的機會。FBP1基因（Fructose-1,6-bisphosphatase-1）（Genbank?No.?NM_000507），與腫瘤的關系尚不清楚，有待進一步研究。

發明內容

本發明旨在以FBP1基因的?DNA甲基化為基礎的檢測手段，提供甲基化FBP1基因在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用。

為實現發明目的，發明人提供如下技術方案：

甲基化FBP1基因在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用。

本發明從實驗得知，FBP1基因在腫瘤細胞以及腫瘤組織中特異性低表達，這是因為其啟動子區DNA發生了腫瘤特異性的高甲基化。逆轉該基因的DNA甲基化，可以恢復FBP1基因在腫瘤細胞中的表達。

發明人和其他研究者都發現在胃癌和胃增生組織中有很多腫瘤相關的基因因為啟動子的超甲基化而產生轉錄靜默，FBP1?基因是發明人研究發現的其中一個新的基因，因FBP1基因啟動子的超甲基化而在胃癌細胞系中低表達，而且在胃癌細胞系中表達外源FBP1基因后可以顯著抑制細胞的增殖，同時發明人也在胃癌和胃增生組織中也證實FBP1基因啟動子甲基化水平明顯高于正常組織。以上實驗都表明FBP1基因是一個抑癌基因，其啟動子的甲基化水平可以作為胃癌早期診斷的生物標記物。

作為優選，根據本發明所述的甲基化FBP1基因在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用，其中，所述的腫瘤診斷、檢測或篩查方法中至少包括一對特異擴增FBP1基因甲基化的引物，所述的引物由上游引物和下游引物組成，其中，所述的上游引物（FBP1?MSP-F）具有如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；下游引物（FBP1?MSP-R）具有如SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。

作為優選，根據本發明所述的甲基化FBP1基因在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用，其中，所述的腫瘤診斷、檢測或篩查方法是以FBP1基因的DNA甲基化為基礎的檢測手段，所述的檢測手段包括MSP法和BGS法。

通過對FBP1基因mRNA的核酸序列分析，發明人發現在它的啟動子區存在一個經典的CpG島（CGI）（圖2?），序列分析的標準如下：GC含量>55%，ObsCpG/ExpCpG>?0.65，?長度大于500個堿基。因此我們采用甲基化特異性PCR（MSP）和亞硫酸鹽處理后的基因組測序（BGS）來進一步驗證FBP1基因啟動子的甲基化。

作為優選，根據本發明所述的甲基化FBP1基因在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用，其中，所述的腫瘤診斷、檢測或篩查方法以FBP1基因甲基化分析為基礎。

作為優選，根據本發明所述的甲基化FBP1基因在制備腫瘤診斷、檢測或篩查藥物中的應用，其中，所述的腫瘤包括但不限于胃癌腫瘤。