[發(fā)明專利]青錢柳愈傷組織及愈傷組織顆粒的懸浮培養(yǎng)方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110372625.7 | 申請日： | 2011-11-22 |
| 公開（公告）號： | CN102487819A | 公開（公告）日： | 2012-06-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 孟凡國;張永江;莫穎蕓;許衡 | 申請（專利權(quán)）人： | 嘉興浙華農(nóng)業(yè)技術(shù)開發(fā)有限公司 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 杭州九洲專利事務所有限公司 33101 | 代理人： | 翁霽明 |
| 地址： | 314026 浙江省嘉興市南湖*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 青錢柳愈傷 組織 顆粒 懸浮 培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種青錢柳愈傷組織及愈傷組織顆粒的懸浮培養(yǎng)方法，其特征在于它主要包括如下步驟：
1）植物體的選擇及無菌處理：選擇3～7月及9～11月間的健康的青錢柳植株，取當年生嫩枝及嫩葉進行清洗，洗滌劑浸泡5-20min，清水沖洗0.5～2h；無菌條件下將清洗后70%～80%酒精消毒5-30s，再利用0.1%的升汞滅菌5～20min或2%-12%次氯酸鈉滅菌5～20min；
2）愈傷組織誘導培養(yǎng)：將滅菌的愈傷組織接種到誘導培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導培養(yǎng)；基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6-BA,20～30g/L的蔗糖，4-7g瓊酯，pH值為5.0～7.0，培養(yǎng)溫度：17～28℃；培養(yǎng)時間：1～25天；光照時間：0～24h；光照強度：0～10000Lux；
3）愈傷組織顆粒懸浮培養(yǎng)：選取生長健康，代謝旺盛，結(jié)構(gòu)疏松的愈傷組織，接種至裝有200ml液體培養(yǎng)基的錐形瓶中震蕩培養(yǎng)；培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6-BA,20～30g/L的蔗糖，pH值為5.0～7.0，培養(yǎng)溫度：17～28℃；培養(yǎng)時間：1～20天；光照時間：0～24h；光照強度：0～10000Lux，轉(zhuǎn)速：50～200r/min；
4）愈傷組織擴大培養(yǎng)：待愈傷組織處于對數(shù)生長期時，選取懸浮培養(yǎng)體系內(nèi)均勻分散生長旺盛的愈傷組織顆粒接種至5L發(fā)酵罐中，剔除瓶底老化褐變的愈傷組織團塊，用發(fā)酵罐進行擴大培養(yǎng)；培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基，加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6-BA,20～30g/L的蔗糖，pH值為5.0～7.0，培養(yǎng)溫度：17～28℃；培養(yǎng)時間：1～20天；光照時間：0～24h；光照強度：0～10000Lux，轉(zhuǎn)速：50～200r/min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青錢柳愈傷組織及愈傷組織顆粒的懸浮培養(yǎng)方法，其特征在于在第1）步驟中，將滅菌后的外植體切成0.3～0.5cm2的組織塊并用于第2）步驟中；而在第2）步驟中，培養(yǎng)期間根據(jù)愈傷組織生長情況，進行轉(zhuǎn)瓶擴繁；在第4）步驟中，至少應根據(jù)pH變化進行補料及轉(zhuǎn)速調(diào)整。
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