[發(fā)明專利]花曲柳的離體快繁方法及其增殖培養(yǎng)基無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110371740.2 | 申請日： | 2011-11-21 |
| 公開（公告）號： | CN102487817A | 公開（公告）日： | 2012-06-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 楊玲;沈海龍;單琳 | 申請（專利權）人： | 東北林業(yè)大學;沈海龍;楊玲 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109 | 代理人： | 韓末洙 |
| 地址： | 150040 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 花曲柳 離體快繁 方法 及其 增殖 培養(yǎng)基 | ||
1.花曲柳的離體快繁方法，其特征在于花曲柳的離體快繁方法，按以下步驟進行：
一、將花曲柳的休眠枝條于室溫進行水培，每天換一次水，培養(yǎng)至休眠枝條的休眠芽萌發(fā)形成新的枝條，切取新的枝條的帶芽莖段進行預處理，然后接種到增殖培養(yǎng)基上，在溫度為20～30℃、濕度為40％～80％、光照強度為20～80μmol·m-2·s-1的條件下培養(yǎng)，每天光照12～24h，每10～30天更換增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)1～2個月，獲得叢生莖芽；所述增殖培養(yǎng)基含有1.0～4.0mg/L細胞分裂素、0～1.0mg/L生長素、20～40g/L蔗糖和5～7g/L瓊脂；
二、挑選正常發(fā)育的叢生莖芽，以單個莖芽為單位進行切離，將切離后的單個莖芽切割成長度為1.5～5.0cm的帶頂芽的莖段，然后將帶頂芽的莖段接種到生根培養(yǎng)基上，在溫度為20～30℃、濕度為40％～80％、光照強度為20～80μmol·m-2·s-1的條件下培養(yǎng)，每天光照12～24h、每10～30天更換生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)1～2個月，獲得再生植株；所述生根培養(yǎng)基含有0.5～2.0mg/L生長素、20～40g/L蔗糖和5～7g/L瓊脂；
三、將株高達3cm、根系發(fā)達且葉片展開的再生植株在培養(yǎng)室內(nèi)敞口煉苗3～5d，然后洗凈根系附著的培養(yǎng)基，再移植到容器中的栽培基質(zhì)中并澆水，用塑料薄膜覆蓋容器口，在溫度為20～30℃、濕度為60％～80％、光照強度為40～80μmol·m-2·s-1、每天光照12～24h的條件下培養(yǎng)至長出的新葉完全展開后，去掉覆蓋的塑料薄膜，獲得花曲柳苗木，即完成花曲柳的離體快繁；
其中步驟一中增殖培養(yǎng)基為改良的B5培養(yǎng)基，pH值為5～6；
步驟一中細胞分裂素為芐基腺嘌呤、玉米素、激動素或噻苯隆；
步驟一中的生長素為萘乙酸或吲哚丁酸；
步驟二中生根培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基或WPM培養(yǎng)基，pH值均為5～6；
步驟二中生長素為萘乙酸或吲哚丁酸；
步驟三中栽培基質(zhì)按體積百分含量由50％的草炭土、40％～50％的蛭石和0％～10％的珍珠巖組成。
2.根據(jù)權利要求1所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟一中的帶芽莖段為帶有頂芽或腋芽且長度為2.0～3.0cm的莖段。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟一中在溫度為22～28℃、濕度為50％～70％、光照強度為40～60μmol·m-2·s-1的條件下培養(yǎng)。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟一中在溫度為25℃、濕度為55％、光照強度為50μmol·m-2·s-1的條件下培養(yǎng)。
5.根據(jù)權利要求3所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟一中增殖培養(yǎng)基含有3.0mg/L細胞分裂素、0.5mg/L生長素、30g/L蔗糖和6g/L瓊脂。
6.根據(jù)權利要求5所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟二中在溫度為22～28℃、濕度為50％～70％、光照強度為40～60μmol·m-2·s-1的條件下培養(yǎng)。
7.根據(jù)權利要求5所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟二中在溫度為25℃、濕度為60％、光照強度為50μmol·m-2·s-1的條件下培養(yǎng)。
8.根據(jù)權利要求6所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟二中生根培養(yǎng)基含有1.0mg/L生長素、30g/L蔗糖和6g/L瓊脂。
9.根據(jù)權利要求8所述的花曲柳的離體快繁方法，其特征在于步驟三中在溫度為25℃、濕度為70％、光照強度為60μmol·m-2·s-1、每天光照16h的條件下培養(yǎng)至長出的新葉完全展開。
10.權利要求1所述的花曲柳的離體快繁方法的增殖培養(yǎng)基，其特征在于花曲柳的離體快繁方法的增殖培養(yǎng)基為改良的B5培養(yǎng)基，由3000mg/L的KNO3、150mg/L的CaCl2·2H2O、740mg/L的MgSO4·7H2O、150mg/L的NaH2PO4·2H2O、0.75mg/L的KI、3mg/L的H3BO3、33.5mg/L的MnSO4·4H2O、2mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的NaMo4·2H2O、0.025mg/L的CuSO4·5H2O、0.025mg/L的CoCl2·6H2O、33.8mg/L的FeSO4·7H2O、37.3mg/L的Na2-EDTA、100mg/L的肌醇、10mg/L的鹽酸硫胺素、1.0mg/L的煙酸、0.1mg/L的鹽酸吡哆素和蒸餾水制成。
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