[發(fā)明專利]一種測定拉薩大黃中曲札茋苷含量的高效液相色譜方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110371198.0
• 申請日: 2011-11-21
• 公開（公告）號: CN102507830A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方芳;龔云麒;陳錦鋅
• 申請（專利權(quán)）人: 昆明制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;李玉秋

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種測定拉薩大黃中曲札茋苷含量的高效液相色譜方法。

背景技術(shù)

拉薩大黃Rheum?lhasaense?A.J.Li?et?P.K.Hsiao是大黃屬波葉組植物。藏族民間用草藥，藏名叫曲札，以根莖曬干入藥。《新修晶珠本草》中將其列為“亞大黃”，即“曲札”藥材的一個習(xí)用品種，其根及根莖入藥。《如意寶樹》中說“亞大黃性緩，銳，化性平”。野生拉薩大黃主產(chǎn)于我國西藏、四川等地。通過前期研究，我們發(fā)現(xiàn)了拉薩大黃中的活性成分曲札茋苷，具有治療缺血性腦卒中的作用，并申請了專利“一種曲札茋苷晶體及其制備方法與應(yīng)用”，專利申請?zhí)?01110166486.2。曲札茋苷為化合物(E)-1-(3，5-二羥苯基)-2-(3-羥基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苯基)乙烯，或成為3，5，3’，4’-四羥基茋-3’-O-β-葡萄糖苷(又有稱3，5，4′-三羥基-茋-3′-O-葡萄糖苷)。化學(xué)結(jié)構(gòu)圖如下：

常用的檢測和分離拉薩大黃中曲札茋苷的方法包括高效液相色譜法等。高效液相色譜法(High?Performance?Liquid?Chromatography/HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。

但是目前，在利用高效液相色譜法檢測和分離拉薩大黃中曲札茋苷的方法中存在著一些問題和缺點。比如，無法與其他成分有效分離、達不到分離度要求等等。通過研究，這些都與所選擇流動相的成分和比例有關(guān)。因此，找到一種合適的使用高效液相色譜法檢測和分離拉薩大黃中曲札茋苷的方法是實現(xiàn)利用曲札茋苷制備藥物以及工業(yè)化生產(chǎn)的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為針對現(xiàn)有技術(shù)中曲札茋苷的高效液相色譜分析方法存在的分離度低的問題，提供了一種準確測定拉薩大黃中曲札茋苷含量的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

一種測定拉薩大黃中曲札茋苷含量的高效液相色譜方法，以有機溶劑和0.1％磷酸水溶液組成的混和溶液為流動相，其組成體積含量為有機溶劑15％-30％，0.1％磷酸水溶液70％-85％，進行高效液相色譜，分析樣品中曲札茋苷的含量。

本發(fā)明的高效液相色譜測定選用最常用的碳十八烷基鍵合硅膠柱進行色譜分析。發(fā)明人還比較了Phenomenex公司Luna?C-18柱、Grace公司Apollo?C-18柱、Nacalai?Tesque公司Cosmosil?C-18柱等，均有較好分離效果。

在本發(fā)明的一個實施例中，發(fā)明人通過取曲札茋苷對照品用甲醇溶解后測定紫外光譜，來確定高效液相色譜的檢測波長。實驗結(jié)果表明，在200nm和216nm的吸收值大但接近末端吸收區(qū)域，318.5nm處的吸收值最大且吸收峰較平坦，故檢測波長選用319nm。

按照常規(guī)方法，本發(fā)明高效液相色譜方法的流動相流速選用1ml/min；色譜柱溫度選用30℃；進樣體積選用10ul。

在本發(fā)明的一個實施例中，發(fā)明人比較了不同流動相，以及不同比例的流動相對檢測分離效果的影響。實驗結(jié)果表明，在其他條件參數(shù)不變的情況下，以甲醇和水按照40∶60的比例混合組成的流動相，供試品中曲札茋苷與其他成分峰分離不好；以乙腈和水按照20∶80的比例混合組成的流動相，供試品中曲札茋苷與其他成分峰分離不好；以乙腈和0.1％磷酸溶液按照10∶90的比例混合組成的流動相進行梯度洗脫，供試品中曲札茋苷與其他成分雖與其他成分分離，但分離度未達到要求；以乙腈和0.1％磷酸溶液按照15∶85、以甲醇和0.1％磷酸溶液按照30∶70以及以有機溶劑和0.1％磷酸溶液按照15-30∶70-85之間任意比例混合組成的流動相進行梯度洗脫，供試品中曲札茋苷與其他成分能夠有效分離，且達到分離度要求。因此，本發(fā)明有機溶劑和0.1％磷酸溶液的組成體積含量為有機溶劑15％-30％，0.1％磷酸水溶液70％-85％。

作為優(yōu)選，本發(fā)明中有機溶劑為乙腈、甲醇、乙醚、正己烷或環(huán)己烷中的一種或幾種組成的混和溶劑。

更優(yōu)選地，本發(fā)明中有機溶劑為乙腈或甲醇。