[發明專利]一種嵌合重組抗原及其用途

有效

• 申請號: 201110370731.1
• 申請日: 2011-11-21
• 公開（公告）號: CN103122033A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發明（設計）人: 葛勝祥;熊君輝;符美娟;許榮均;喬杉;李芳;羅文新;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權）人: 廈門大學;北京萬泰生物藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;G01N33/569
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.一種嵌合重組抗原，其包含分別衍生自Rv3875、Rv3874和TB7.7的3個抗原區，

優選地，衍生自Rv3875的抗原區是包含Rv3875的第1-80位氨基酸殘基(aa?1-80)的Rv3875蛋白片段；

優選地，衍生自Rv3874的抗原區是包含Rv3874的第1-100位氨基酸殘基(aa?1-100)的Rv3874蛋白片段；

優選地，衍生自TB7.7的抗原區是包含TB7.7的第37-81位氨基酸殘基(aa?37-81)的TB7.7蛋白片段；

優選地，所述嵌合重組抗原包含Rv3875的第1-80位氨基酸殘基(aa1-80)，Rv3874的第1-100位氨基酸殘基(aa?1-100)以及TB7.7的第37-81位氨基酸殘基(aa?37-81)；

優選地，所述嵌合重組抗原所包含的3個抗原區通過直接融合的方式或通過接頭進行連接；

優選地，所述嵌合重組抗原還在其N末端和/或C末端包含標簽；

優選地，所述嵌合重組抗原具有如SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列。

2.多核苷酸，其編碼權利要求1的嵌合重組抗原；

優選地，所述多核苷酸具有如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列。

3.包含權利要求2的多核苷酸的構建體。

4.載體，其包含權利要求2的多核苷酸或者權利要求3的構建體。

5.宿主細胞，其包含權利要求2的多核苷酸或者權利要求3的構建體或者權利要求4的載體。

6.組合物，其包含權利要求1的嵌合重組抗原，任選地還包含藥學可接受的載體，例如緩沖劑。

7.體外檢測樣品中的結核分枝桿菌特異性T細胞免疫反應的方法，其包括下述步驟：

1)用權利要求1的嵌合重組抗原刺激所述樣品；和

2)檢測經刺激后的所述樣品中細胞因子的水平；

其中，與對照相比，經刺激后的樣品中所述細胞因子的水平的升高表明，該樣品中存在結核分枝桿菌特異性T細胞免疫反應，并且，所述細胞因子的水平的高低反映所述樣品中結核分枝桿菌特異性T細胞免疫反應的水平的高低，

其中，所述樣品是抗凝全血或外周血單核細胞(PBMC)；

優選地，所述細胞因子是IFN-γ和/或IL-2；

優選地，所述對照是未用所述嵌合重組抗原刺激的所述待檢測的樣品，和/或用所述嵌合重組抗原刺激的未感染結核分枝桿菌的樣品或樣品群體；

優選地，所述抗凝全血是用抗凝劑(例如肝素)抗凝的全血；

優選地，所述抗凝全血是新鮮采集的抗凝全血，例如，在采集后室溫放置不超過12個小時，優選不超過10、8、6、4或2個小時的抗凝全血；

優選地，所述嵌合重組抗原包含在培養基(例如但不限于，RPMI-1640培養基和DMEM培養基)中；

優選地，在靜置或非靜置條件下，優選在靜置條件下進行步驟1)的刺激；

優選地，在30℃-39℃，優選35℃-37℃，更優選37℃下進行步驟1)的刺激；

優選地，步驟1)的刺激進行11-39個小時，優選15-35個小時，優選20-30個小時，更優選20-24個小時；

優選地，所述方法還設置了陽性對照，其是用非特異性T細胞刺激原刺激的待檢測的樣品；優選地，所述非特異性T細胞刺激原是植物凝集素(PHA)和刀豆球蛋白A。

8.權利要求1的嵌合重組抗原或組合物用于制備試劑盒的用途，所述試劑盒用于體外檢測樣品中的結核分枝桿菌特異性T細胞免疫反應，或用于診斷受試者是否被結核分枝桿菌感染，或用于評價抗結核治療效果。

9.一種試劑盒，其包含權利要求1的嵌合重組抗原或權利要求6的組合物，所述試劑盒任選地還包含一種或多種以下試劑：

1)用于檢測細胞因子(例如，IFN-γ和/或IL-2)的水平的試劑；

2)采血裝置，例如無熱原真空采血管；

3)抗凝劑，例如肝素；

4)培養基，例如但不限于RPMI-1640培養基和DMEM培養基；和

5)非特異性T細胞刺激原，例如但不限于植物凝集素和刀豆球蛋白A。