[發明專利]一種基因組DNA提取方法

有效

• 申請號: 201110368801.X
• 申請日: 2011-11-18
• 公開（公告）號: CN102382821A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 向瀏欣;蔡應繁
• 申請（專利權）人: 重慶郵電大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 江雪

技術領域

本發明涉及一種基因組DNA提取方法，尤其涉及一種一次性獲取較多DNA的提取方法。

背景技術

提取基因組DNA用于PCR分離基因、Southern雜交、基因組文庫構建等。由于提取基因組DNA花費時間長，因此，通常會通過一次性提取較多DNA節約人力物力，而對于DNA需求量較大的實驗如基因組文庫構建，一次性獲取較多DNA就相當必要了。

提取基因組DNA的方法很多，如濃鹽法、陰離子去污劑法、酚氯仿抽提法、水抽提法等，但總的方法步驟和原理為：

DNA分離：根據濃鹽法、陰離子去污劑法、酚氯仿抽提法或水抽提法提供的試劑將已破碎細胞的溶液中的基因組DNA與蛋白質、脂類、糖類、RNA等分離，獲得DNA水溶液；

DNA析出：在DNA水溶液中加入0.8倍體積的異丙醇或2倍體積的無水乙醇使DNA析出；

DNA洗滌干燥：析出DNA后，通過離心棄上清獲取DNA沉淀，再將沉淀用70％乙醇洗滌2-3次，并于室溫干燥；

DNA溶解保存：加入水或TE溶液(10mmol/L?Tris-Cl、1mmol/L?EDTA·二鈉、pH?8.0)溶解已干燥的DNA，放-20℃存放。

為獲取較多DNA首要采用的方法是增加用于提取DNA的材料的量，與之相適應，提取DNA時選擇容積較大的容器，一般采用5-50ml離心管(提取少量DNA時一般使用1.5ml離心管)。當然，通過實驗過程中的操作規范和一些操作方法的改進也會適當增加DNA提取的量。

現有文獻中，由高等教育出版社2007年出版、魏群主編的《分子生物學實驗指導》(第2版)的第二篇實驗九植物基因組DNA的提取，采用酚氯仿抽提法提取基因組DNA，采用50ml離心管為容器以一次性提取較多的實驗材料；由武漢大學出版社2009年出版、嚴海燕主編的《基因工程與分子生物學實驗教程》的實驗一植物基因組DNA的提取和酶切，采用酚氯仿抽提法提取基因組DNA，采用7ml離心管為容器以一次性提取較多的實驗材料。但是，由于一次性提取的DNA量較多，在最后加入水或TE溶液溶解DNA時，大量DNA成團無法溶解。雖然可以采用高溫水浴加熱或用槍頭吸打溶液的方法促使DNA溶解，但一般謹慎采用，因為高溫水浴加熱所需時間長、會造成DNA降解、而且溶解仍不完全；槍頭吸打溶液會造成DNA機械性剪切，使DNA長度達不到后續實驗要求。DNA不能快速充分溶解直接造成其濃度低，則DNA的有效質量低，無法滿足后續實驗對DNA質量的要求，尤其是構建基因組文庫。并且，在現有提取基因組DNA方法中，沒有對DNA做質量預測，也沒有對DNA做濃度預測的具體方法的提出，在溶解DNA時加入的水或TE溶液的體積僅憑運氣或憑經驗、無法掌控，極易造成濃度達不到后續實驗要求的濃度范圍而使DNA提取實驗功虧一簣。因此，很有必要尋找一種在不影響DNA長度的情況下，使DNA快速充分溶解，且保證DNA濃度達后續實驗要求的提取方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種基因組DNA提取方法，在不影響DNA長度的前提下可以使DNA快速、充分溶解，且保證DNA濃度達后續實驗要求。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

一種基因組DNA提取方法，包括DNA分離、DNA析出、DNA洗滌干燥和DNA溶解保存，所述DNA分離得到的DNA水溶液平均分裝到多個1.5-5ml小離心管中；所述DNA溶解保存前對所述小離心管中DNA進行質量預測。

DNA水溶液通過分裝后再分別進行DNA析出、DNA洗滌干燥和DNA溶解保存，由于每個小離心管中DNA的量少，則DNA溶解保存時加入少量水或TE溶液即可快速溶解干燥的DNA，該方法利用增加溶質與溶劑接觸面積提高溶解速度和溶解程度的原理，甚至不需吹打、不需加熱就能使DNA快速充分溶解，從而解決DNA溶解難的問題；不吹打不加熱也降低了DNA斷裂的幾率，保證了DNA的長度。通過平均分裝，使DNA質量預測成為可能，以便控制DNA濃度達后續實驗要求。

優選的，所述DNA水溶液平均分裝到多個1.5ml小離心管中。1.5ml小離心管底部尖細，離心時有利于DNA沉積并貼于管底，且加入少至5μl體積的溶劑就能覆蓋管底、覆蓋DNA，即使DNA干燥后肉眼不易看見也能保證其被完全覆蓋而溶解。