[發(fā)明專利]一種柑橘病毒分子鑒定和防治方法無效
申請?zhí)枺?/td> | 201110368503.0 | 申請日: | 2011-11-20 |
公開(公告)號: | CN103122391A | 公開(公告)日: | 2013-05-29 |
發(fā)明(設(shè)計)人: | 李紅 | 申請(專利權(quán))人: | 李紅 |
主分類號: | C12Q1/70 | 分類號: | C12Q1/70;C12Q1/68 |
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地址: | 402360 *** | 國省代碼: | 重慶;85 |
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摘要: | |||
搜索關(guān)鍵詞: | 一種 柑橘 病毒 分子 鑒定 防治 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種柑橘病毒分子鑒定和防治方法,尤其是CTV在田間由蚜蟲傳播,我市存在流行條件,種植無病毒苗木缺乏顯著防效。據(jù)國外經(jīng)驗,弱毒系交叉保護(hù)技術(shù)可以有效防治該病。其方法是優(yōu)良品種脫毒后在苗期接種弱株系和用帶有弱株系的母樹繁殖苗木。攜帶弱株系的植株可以拮抗衰退病毒強(qiáng)株系的為害,保持較正常的生長、結(jié)果。迄今,CTV弱毒系交叉保護(hù)工作在我國基本屬空白。
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背景技術(shù)
上世紀(jì)90年代以來,我市柚類品種得到較大發(fā)展,一些地方出現(xiàn)了柑橘衰退病(Citrus?tristeza?virus,簡稱CTV)為害柚類問題。近年來,伴隨我市柑桔品種結(jié)構(gòu)調(diào)整,甜橙發(fā)展比例大幅度上升,一些地方出現(xiàn)了柑橘衰退病為害問題。該病通過桔蚜傳播,并且呈現(xiàn)不斷蔓延的趨勢,單純應(yīng)用無病毒苗木不能防除此病,存在流行條件(桔蚜、強(qiáng)毒株和感病品種)的柑桔栽培區(qū),最有效的防治方法是應(yīng)用弱毒系交叉保護(hù)技術(shù)。因此,為規(guī)避我市柑橘大發(fā)展后柑橘衰退病大流行風(fēng)險,通過分子鑒定快速篩選出有保護(hù)作用的柑橘衰退病毒弱毒株以應(yīng)用于交叉保護(hù)我市柑桔(特別是甜橙)生產(chǎn)的健康發(fā)展,具有十分重要的現(xiàn)實和科學(xué)意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種柑橘病毒分子鑒定和防治方法,它采用指示植物、血清學(xué)和dsRNA技術(shù)對部分CTV株系進(jìn)行過比較研究。為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明所采用技術(shù)方案是:應(yīng)用弱毒系防治莖陷點型CTV的機(jī)理研究,從田間采集的CTV分離株可能感染多個株系,因而需要進(jìn)行單蚜傳毒分離純化,以期獲得純的弱毒株。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果是:對篩選出來的弱毒株與國外典型株系進(jìn)行分子水平上的比對分析,將為克服其品種和區(qū)域?qū);蕴峁┮罁?jù),亦為今后構(gòu)建具有自主知識產(chǎn)權(quán)的弱毒株(疫苗)奠定基礎(chǔ)。
具體實施方式
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1、將毒源繁殖在甜橙實生苗上,進(jìn)行單蚜傳毒分離純化,獲得純的可能的弱毒株;應(yīng)用DTBIA定期監(jiān)控經(jīng)單蚜傳毒的分離株,通過RFLP和多重RT-PCR分析,鑒定分離純化效果;
2、應(yīng)用5種標(biāo)鑒定上述弱毒株及有代表性的強(qiáng)毒株發(fā)病情況;
3、對從本市篩選的有潛在保護(hù)作用的CTV弱毒株(對照采用從國外引進(jìn)的3-4個弱毒株)分別在網(wǎng)室進(jìn)行橘蚜攻毒和田間自然攻毒拮抗試驗;
4.?????應(yīng)用相關(guān)軟件分析基因序列差異程度和繪制樹狀分類圖;
5.?????應(yīng)用50或100頭桔蚜/株在網(wǎng)室中攻毒接種進(jìn)行拮抗試驗;
6.?????應(yīng)用RFLP和多重RT-PCR技術(shù)監(jiān)控拮抗試驗中攻擊毒株的分布。
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