[發明專利]一種黑曲霉及其應用及發酵制備檸檬酸的方法

有效

• 申請號: 201110367432.2
• 申請日: 2011-11-18
• 公開（公告）號: CN102399702A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 張軍華;周勇;鐘華;盧宗梅;馮志菲
• 申請（專利權）人: 中糧生物化學（安徽）股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/48;C12R1/685
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 王浩然;王鳳桐

技術領域

本發明涉及一種黑曲霉(Aspergillus?niger)(該菌株于2011年10月14日被保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)(保藏單位的縮寫為CGMCC)，保藏編號為CGMCC5343)及其應用，以及采用該黑曲霉作為發酵菌種發酵制備檸檬酸的方法。?

背景技術

檸檬酸是有機酸中的第一大酸，由于物理、化學等方面的優異性能，廣泛應用于醫藥、化學、電子、紡織、石油、皮革、建筑、攝影、塑料、鑄造和陶瓷等工業領域。?

檸檬酸的生產方法主要有兩種：一種是從天然含檸檬酸的果汁中提取；另一種是用發酵法進行生產，目前工業上主要以黑曲霉發酵法生產檸檬酸為主。具體的做法是將黑曲霉接種到發酵培養基中，發酵培養基中含有淀粉質原料酶解產物和氮源，經過發酵和固液分離得到檸檬酸的溶液。為了提高檸檬酸的生產能力，進行菌株改良，開發具有高產率的菌株是重點的研究方向。?

發明內容

本發明的目的是為了提高黑曲霉發酵法生產檸檬酸的生產能力，提供一種新的黑曲霉菌株及采用該黑曲霉作為發酵菌種發酵制備檸檬酸的方法。?

為了實現上述目的，一方面，本發明提供了一種黑曲霉，其特征在于，所述黑曲霉的保藏編號為CGMCC5343。?

另一方面，本發明提供了一種如上所述的黑曲霉在發酵制備檸檬酸中的應用。?

第三方面，本發明提供了一種發酵制備檸檬酸的方法，其特征在于，所述方法包括在生成檸檬酸的條件下，將如上所述的黑曲霉接種至發酵培養基中進行發酵，得到發酵液。?

本發明提供的黑曲霉，保藏編號為CGMCC5343，采用該黑曲霉作為發酵菌種發酵制備檸檬酸，可提高終點檸檬酸含量和糖酸轉化率。?

本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。?

生物保藏?

本發明的菌株被命名為黑曲霉(Aspergillus?niger)，并于2011年10月14日被保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)(保藏單位的縮寫為CGMCC)，保藏編號為CGMCC5343。?

具體實施方式

以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。?

一方面，本發明提供了一種黑曲霉，黑曲霉的保藏編號為CGMCC5343。?

將該黑曲霉菌株分別接種在察氏瓊脂培養基和PDA培養基上進行培養，并定期在顯微鏡下觀察，發現：?

在察氏瓊脂培養基上生長緩慢，35℃培養7d，菌落直徑25-30mm，分生孢子梗較長，分生孢子著生稀疏。?

在PDA培養基上生長較快，35℃培養7d，菌落直徑60-70mm，平坦，具放射狀皺紋，質地絲絨狀，顏色炭黑色，有少量無色滲出液產生，反面淡黃褐色。分生孢子頭球型，直徑50-80μm；孢梗莖直徑10-15μm，壁平滑；頂囊球型，直徑30-40μm，表面全面可育；產孢結構雙層，梗基10-12×2-3μm；瓶梗6-8×2-3μm；分生孢子球型，直徑3-4μm，壁粗糙。?

本發明中的黑曲霉菌株是通過將黑曲霉Co827作為出發菌株，經等離子體誘變技術得到的。?

該等離子體誘變技術是將出發菌株用0.85％生理鹽水從培養基上洗脫下來，用生理鹽水調節孢子懸液濃度至10⁵-10⁶個/mL。取孢子懸液10ul，將其滴加在滅菌冷卻后的載玻片上。將制得的樣品載片置于離子注入機載臺上進行氦離子注入誘變；射頻電壓為200v、13.56MHz，射流溫度30±3℃；輻照時間為60s-210s。?

將處理后的載片用0.5mL生理鹽水洗脫，涂布于篩選的固體培養基(普通PDA培養基瓊脂加量4％，另加檸檬酸30％)上，35℃培養2天，在致死率90％以上的平板上挑取單菌落，在無菌條件下將其轉接入固體培養基中進行擴大培養，35℃培養7-8天。?

對獲得的菌株進行搖瓶篩選，最后獲得一株黑曲霉菌株，即本發明的黑曲霉，保藏編號為CGMCC5343。?

另一方面，本發明提供了如上所述的黑曲霉在發酵制備檸檬酸中的應用。?