[發(fā)明專利]一種預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110366701.3
• 申請日: 2011-11-18
• 公開（公告）號: CN102363813A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊華;楊永林;劉守仁;馮靜
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)墾科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 石河子恒智專利代理事務(wù)所 65102
• 代理人: 朱永慧

1.一種預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征主要包括以下步驟：

（1）根據(jù)綿羊KAP1.1基因序列設(shè)計一對引物：

KF1:?<210>1，

KR1:?<210>2；

（2）從綿羊血液中提取基因組DNA，利用該引物對綿羊的基因組DNA進行PCR擴增；

（3）使用聚丙烯酰胺凝膠對PCR產(chǎn)物進行電泳分離，檢測出KAP1.1基因外顯子中的60bp和30bp插入?/?缺失的變異位點；

（4）多態(tài)性分析：當(dāng)綿羊KAP1.1基因外顯子缺失60bp時，PCR擴增片段長度為281bp，將其命名為CC基因型；當(dāng)綿羊KAP1.1基因外顯子缺失30bp時，PCR擴增片段長度為311bp，將其命名為BB基因型；當(dāng)綿羊KAP1.1基因外顯子含有60bp和30bp插入時，PCR擴增片段長度為341bp，將其命名為AA基因型；該位點雜合的個體PCR擴增產(chǎn)物為兩條帶，分別為341bp和311bp，將其命名為AB基因型；341bp和281bp，將其命名為AC基因型；311bp和281bp，將其命名為BC基因型，具有BB基因型綿羊的平均毛纖維直徑顯著小于具有AA、BC、AC、AB和CC基因型綿羊的平均毛纖維直徑。

2.如權(quán)利要求1所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是：其中用于分析多態(tài)性的位點選自綿羊KAP1.1基因如下序列中的60個和30個堿基的插入/缺失，

1?caaccctcct?ctcaacccaa?ctcctgacac?catggcctgc?tgttccacca?gcttctgtgg

???????61?atttcccatc?tgttccactg?gtgggacctg?tggctccagt?ccctgccagc?agacctgctg

??????121?ccagaccagc?tgctgccagc?caacctccat?ccagaccagc?tgctgccagc?caacttccat

??????181?ccagaccagc?tgctgccaac?cga(tctccat?ccagaccagc?tgctgccagc?caa)cctccat

??????241?ccagaccagc?tgctgccagc?caacctgcct?ccagaccagt?ggctgtgaga?cgggctgtgg

??????301?cattggtggc?agcattggct?atggccaggt?gggtagcagc?g，

以上序列下劃線部分為60個堿基的插入/缺失，在括號內(nèi)的劃線部分為30個堿基的插入/缺失。

3.如權(quán)利要求1或2所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是：其中分析基因多態(tài)性的方法是通過檢測堿基的插入/缺失而分類的基因型,其中用于分析基因多態(tài)性的部位是外顯子。

4.如權(quán)利要求3所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是：其中用于分析基因多態(tài)性的部位是由KF1和KR1表示的引物擴增的部分外顯子區(qū)。

5.如權(quán)利要求1或2所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是：其中用于聚丙烯酰胺凝膠電泳的丙烯酰胺凝膠濃度為12%或14%。

6.如權(quán)利要求3所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是：其中用于聚丙烯酰胺凝膠電泳的丙烯酰胺凝膠濃度為12%或14%。

7.如權(quán)利要求4所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是：其中用于聚丙烯酰胺凝膠電泳的丙烯酰胺凝膠濃度為12%或14%。

8.如權(quán)利要求1或2所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是所述的PCR擴增退火溫度為65℃。

9.如權(quán)利要求4所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是所述的PCR擴增退火溫度為65℃。

10.如權(quán)利要求7所述的預(yù)示和鑒定綿羊毛纖維直徑的分子標(biāo)記選擇方法，其特征是所述的PCR擴增退火溫度為65℃。