[發明專利]一株鏈霉菌及其在生產放線菌素中的應用

有效

• 申請號: 201110366034.9
• 申請日: 2011-11-17
• 公開（公告）號: CN102391967A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 張立新;宋福行;陳彩霞;郭徽;傅成章;代煥琴;劉雪婷;謝峰;楊娜;余珂;王倩
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/02;C12R1/465
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一株鏈霉菌及其在生產放線菌素中的應用。

背景技術

癌癥是一種非常古老的疾病，伴隨著整個人類發展的歷史，嚴重威脅著人類的健康與生命。放線菌素能夠通過影響核酸合成、誘導細胞分化、誘導細胞凋亡、抑制一些蛋白酶活性及影響細胞周期等方式發揮其抗腫瘤活性。放線菌素還可通過與DNA結合抑制RNA合成而發揮抗菌、抗病毒的作用。

放線菌素D已經成為較為理想的抗腫瘤藥物，廣泛應用于惡性腫瘤的臨床治療、結合手術治療和放射治療，對腎母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、神經母細胞瘤、霍奇金病、絨毛膜癌及睪丸腫瘤的治療有效，尤其是對兒童腎母細胞瘤有很好的治療效果，也常與其他藥物聯合用于腫瘤的治療與研究。

放線菌素X₂除了更好的抗腫瘤作用外，對病毒性心肌炎最常見的病原體柯薩奇病毒(CVB3)有顯著地抑制作用。

上世紀后期人們開始對放線菌素進行深入研究，主要集中于放線菌素的生物學功能和臨床藥理學研究，目前放線菌素已不僅是臨床上重要的抗腫瘤藥物，也越來越成為分子生物學和細胞生物學研究的工具。

放線菌素的產生菌已見報道的有近30種，但基本上都是單一成分高產，且在這些產生菌中，放線菌素D的產量最高為野生菌株0.21mg/ml、誘變菌株0.85mg/ml，放線菌素X₂的最高產量為0.15mg/ml。

發明內容

本發明的目的是提供一株鏈霉菌及其在生產放線菌素中的應用。

本發明提供的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)MS449，已于2011年11月09日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏號為CGMCCNo.5452。

本發明還保護所述鏈霉菌MS449在生產放線菌素中的應用。所述放線菌素可為放線菌素X₂、放線菌素D和放線菌素X_0β中的至少一種。

本發明還保護一種種子培養基，是通過如下方法制備得到的培養基：將20-30g可溶性淀粉、0.2-0.6g?L-天冬酰胺、0.5-1.0g?KNO₃、0.2-0.6g?K₂HPO₄·H₂O、0.2-0.6gNaCl和0.2-1.0g?MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。所述種子培養基的pH可為7.0-7.5。所述種子培養基具體可通過如下方法制備得到：將25g可溶性淀粉、0.4g?L-天冬酰胺、0.8g?KNO₃、0.4g?K₂HPO₄·H₂O、0.4g?NaCl和0.6g?MgSO₄·7H₂O用水定容至1L。

本發明還保護一種發酵培養基，是通過如下方法制備得到的培養基：將5-15g葡萄糖、10-30g稷粉、10-30g棉籽蛋白粉和10-30g?3-(N-嗎啉基)丙磺酸用水定容至1L。所述發酵培養基的pH可為7.0-7.5。所述發酵培養基培養基具體可通過如下方法制備得到：將10g葡萄糖、20g稷粉、20g棉籽蛋白粉和20g?3-(N-嗎啉基)丙磺酸用水定容至1L。

本發明還保護一種制備放線菌素的方法，是發酵所述鏈霉菌MS449，得到放線菌素。所述發酵的條件具體可為25-30℃、140-200rpm、6-20天(如6-15天)。所述發酵的條件具體可為28℃、180rpm、15天。

所述方法具體可包括如下步驟：將所述鏈霉菌MS449的種子液接種至所述發酵培養基中發酵并收獲發酵液。

所述方法中，可將5ml所述種子液接種至100ml所述發酵培養基中。所述種子液具體可通過如下方法制備：將所述鏈霉菌MS449接種于所述種子培養基中，25-30℃(如28℃)、140-200rpm(如180rpm)培養2-6天(如96小時)，得到種子液。

所述方法還可包括如下步驟：

(1)將所述發酵液離心(離心參數具體可為：4℃、8000轉/min、15min)，分別收集上清液和沉淀；

(2)將步驟(1)獲得的沉淀用丙酮浸提(可室溫靜置10小時)，離心(離心參數具體可為：4℃、8000轉/min、15min)并收集上清液；