[發(fā)明專利]一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110365866.9
• 申請(qǐng)日: 2011-11-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102363761A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-02-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周穎;尹彬彬;黃家英;陳建慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東安克生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/28;C12R1/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明屬于產(chǎn)酶菌種領(lǐng)域，具體涉及一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化方法。

背景技術(shù)

耐高溫α-淀粉酶廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中，是一種內(nèi)切葡萄糖苷酶，是目前最重要的工業(yè)酶制劑之一。目前生產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶使用最為廣泛的是細(xì)菌，尤其是桿菌（如解淀粉芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌）。耐高溫α-淀粉酶以其優(yōu)良的特性的特性廣泛應(yīng)用于造紙、紡織、印染、檸檬酸、乳酸發(fā)酵、啤酒、酒精、味精、糖等工業(yè)領(lǐng)域，用量大，市場(chǎng)占有率高，應(yīng)用前景非常廣泛。

耐高溫α-淀粉酶能在較高的溫度下迅速水解淀粉分子中的α-1,4葡萄糖苷鍵，任意切割凝膠淀粉成長(zhǎng)短不一的短鏈糊精和少量的低聚糖、葡萄糖和麥芽糖，從而使淀粉糊的粘度迅速下降。

地衣芽孢桿菌10181為芽孢桿菌科細(xì)菌，革蘭氏陽(yáng)性桿菌，細(xì)胞大小為0．8μm×（1．5～3．5）μm，細(xì)胞形態(tài)和排列呈桿狀、單生，產(chǎn)生近中生的橢圓狀芽孢，孢囊稍膨大，在淀粉平板培養(yǎng)基上的菌落為扁平、邊緣不整齊、白色、表面粗糙皺褶，24h后菌落直徑為3mm，周圍有明顯的淀粉水解圈，有動(dòng)力。

地衣芽孢桿菌CICC?10181是由中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏，中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心負(fù)責(zé)全國(guó)工業(yè)生產(chǎn)與研究應(yīng)用微生物菌種的收集、保藏與供應(yīng)，微生物菌種保藏技術(shù)的研究與培訓(xùn)等，也是國(guó)際菌種保藏聯(lián)合會(huì)（WFCC）和中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)成員之一。

隨著社會(huì)的發(fā)展，越來(lái)越要求酶活力高，添加量少的酶制劑產(chǎn)品，而現(xiàn)在一般的生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的耐高溫α-淀粉酶制劑的發(fā)酵液酶活力低，后處理工序復(fù)雜、生產(chǎn)成本相對(duì)較高。為了降低生產(chǎn)成本并滿足市場(chǎng)的要求，需要開(kāi)發(fā)或者優(yōu)化出一株產(chǎn)酶活力高的菌株。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶-地衣芽孢桿菌10181的優(yōu)化方法。

本發(fā)明是通過(guò)下述的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟：

a.?菌種的活化培養(yǎng)：將冷凍管保存的地衣芽孢桿菌10181菌種拿出活化，活化培養(yǎng)基：牛肉膏0.5～0.7%、蛋白胨1.0～1.2%、氯化鈉0.3～0.5%、瓊脂1.5～2.0%、余量為水，加熱以上的組份至其溶解，調(diào)pH在6.8～7.2之間，裝瓶包扎，在0.1Mpa下加熱到120℃～122℃滅菌20～30min，冷卻到15～50℃在無(wú)菌條件下倒平板或擺斜面，備用；由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，27℃～30℃，培養(yǎng)1～2天；挑取單菌落36～40℃，培養(yǎng)1～2天，保存?zhèn)溆茫?

?b.菌種的優(yōu)化：將保存的菌種劃線于淀粉平板培養(yǎng)基上：蛋白胨1～2%，酵母粉0.1～0.5%、牛肉粉0.3～0.7%、玉米淀粉0.5～1.8%、?葡萄糖0.2～0.4%、瓊脂1.5～2.0%、余量為水，調(diào)pH6.5～7.0，在121℃下滅菌20～30min，36℃～42℃培養(yǎng)1～1.5天，選出淀粉水解圈大的單菌落，來(lái)進(jìn)行種子擴(kuò)培；

c.菌種的擴(kuò)培：玉米淀粉5～10%，豆餅粉1～4%，硫酸銨0.5～1%，氯化鈣0.02～0.05%，磷酸氫二鉀1.3～2%，磷酸二氫鉀1.3～2%，消泡劑0.02～0.05%、余量為水，調(diào)pH6.5～7.0，在121℃下滅菌40?min，將液體搖瓶種子液接入種子罐培養(yǎng)基中,接種量為1～3%，36℃～42℃培養(yǎng)1～1.5天；

d.發(fā)酵后提取：發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液脫色、經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾后，再經(jīng)過(guò)超濾循環(huán)，制得液體酶制劑；脫色投料比為發(fā)酵液：活性炭＝90～100：1，攪拌轉(zhuǎn)速：60～80rpm，脫色時(shí)間：1～1.5h；板框進(jìn)料待出濾液后，先啟動(dòng)濾液上料泵打回流，濾液澄清后，打開(kāi)袋式過(guò)濾器前的進(jìn)料閥門(mén)，關(guān)閉回流閥，將濾液打往超濾循環(huán)罐；超濾濃縮工序：?清洗：3～4bar條件下內(nèi)循環(huán)10分鐘，超濾：壓力穩(wěn)定4～5bar。

優(yōu)選的，一種產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶菌種的優(yōu)化方法，包括下述的步驟：

a.?菌種的活化培養(yǎng)

平板培養(yǎng)基的配方：牛肉膏0.7%，蛋白胨1.2%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.8?%，余量為水，加熱以上的組份使其溶解，調(diào)pH在7.2，裝瓶包扎，在0.1Mpa下加熱到121℃滅菌30min，冷卻到45℃在無(wú)菌條件下倒平板或擺斜面，備用；

接種與培養(yǎng)：由冷凍管菌種劃線接種于平板培養(yǎng)基，38℃，培養(yǎng)30h；挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，38℃，培養(yǎng)30h，保存?zhèn)溆茫?

b.?菌種的優(yōu)化