[發明專利]檢測發酵液多糖濃度的方法有效
| 申請號： | 201110365639.6 | 申請日： | 2011-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN102507924A | 公開（公告）日： | 2012-06-20 |
| 發明（設計）人： | 韓煉;趙丹;羅芹;朱琳;趙濤;陳克平;曾令學;楊襄誠;朱聰;李洪光 | 申請（專利權）人： | 成都歐林生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/543 | 分類號： | G01N33/543;G01N21/78 |
| 代理公司： | 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 檢測 發酵 多糖 濃度 方法 | ||
【權利要求書】：
1.檢測發酵液多糖濃度的方法，其特征在于：它包括以下步驟：
（1）稱取一定量的發酵液多糖樣品置于干凈的容器內，樣品液的濃度為10～100pg/ml；
（2）收集經b型流感嗜血桿菌免疫的濃度為0.5～1.5ng/ml的家兔血清，分離并用蛋白A親和層析法純化，用SDS-PAGE電泳進行純度檢測，待純度為90%以上時，即得兔b型流感嗜血桿菌莢膜多糖抗體；
（3）用（2）中所得的兔b型流感嗜血桿菌莢膜多糖抗體包被酶標微孔板，制成兔b型流感嗜血桿菌莢膜多糖固相抗體；
（4）往微孔板中逐漸加入發酵液多糖樣品，加入完全后與用HRP標記的兔b型流感嗜血桿菌莢膜多糖固相抗體結合，形成固相抗體-抗原-酶標抗體復合物，HRP的濃度為0.5～1.5ng/ml；
（5）將（4）中所得的固相抗體-抗原-酶標抗體復合物徹底洗滌，除去未結合的酶標抗體、雜質，加入TMB進行顯色反應，TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，在酸的作用下轉化成黃色，顏色的深淺和樣品中的b型流感嗜血桿菌莢膜多糖含量呈正相關；
（6）用酶標儀在400～500nm波長下測定吸光度，通過標準曲線，計算樣品中b型流感嗜血桿菌莢膜多糖的濃度。
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