[發明專利]一種糖類過敏原的測定方法

有效

• 申請號: 201110364832.8
• 申請日: 2011-11-17
• 公開（公告）號: CN102520163A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 徐春祥;楊池;王明亮
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/552;G01N27/48
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種糖類過敏原的測定方法，其特征在于利用氧化鋅量子點標記糖類過敏原；同時在電解池中的芯片上固定化一層凝集素，在一系列已知濃度的待測糖類過敏原溶液中，使標記了氧化鋅量子點的糖類過敏原和芯片上的凝集素進行特異性結合，把標記在糖類過敏原上的氧化鋅量子點連接到芯片上；然后用酸性溶液把氧化鋅量子點溶解為鋅離子，用溶出伏安法測定溶出的鋅離子的濃度，建立鋅離子濃度與糖類過敏原濃度之間的關系，從而確定待測糖類過敏原濃度。

2.根據權利要求1所述的糖類過敏原的測定方法，其特征在于具體測定方法為：

a.將0.5～5毫克氧化鋅量子點分散到50～200微升1納克/毫升的糖類過敏原溶液中，在室溫下震蕩10min，離心，用pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液清洗三次。再加500μL1～2％w/v牛血清蛋白，15～35℃下震蕩10～30min，離心，用pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液清洗三次；最終分散于50～150μL?0.05～0.1％(v/v)曲拉通X-100磷酸緩沖溶液，不用時保存于冰箱保溫層；

b.將二氧化硅片或玻璃片分別在丙酮、乙醇和水中分別超聲5min，然后在60～80℃的NH₄OH/H₂O₂/H₂O??1∶1∶5～7，v/v和HCl/H₂O₂/H₂O??1∶1∶4～6，v/v分別浸泡5～10min；拿出后用清水洗干凈，晾干；然后放入5％v/v的3-胺丙基乙氧基硅烷的乙醇溶液中浸泡2～5h，洗干凈、晾干，再放入10～15mL含1～2％v/v戊二醛pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液，于4℃靜置8～12h，隨后用去離子水清洗、晾干，待用；

c.將修飾后的芯片安裝在一個孔徑小于芯片邊長的電解池中，將50μL含1～2mg/mL凝集素pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液滴在上述處理好的芯片上，并于4℃靜置8～12h，隨后用去離子水清洗；然后將上述芯片用含0.5～1％w/v牛血清蛋白和0.05～0.1％v/v吐溫-20浸泡0.5～1h，隨后用去離子水清洗、待用；

d.將處理好的待測樣品滴在制備好的芯片上，放置15～50min，用去離子水清洗芯片表面3次；

e.向電解池中注入pH值為1～3的鹽酸溶液溶解芯片上的氧化鋅量子點，并用pH值為1～3鹽酸溶液洗三次，合并溶解液和洗液，加pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液至1～3毫升；

f.用鉑電極為對電極，銀/氯化銀電極為參比電極，汞膜電極為工作電極，-0.8～-1.5伏富集90～150秒，用方波伏安法測鋅的溶出峰，電位約在-1.1伏；

g.改變第1步糖類過敏原濃度，重復第e、f、g步，測定一系列糖類過敏原濃度相對應的鋅的溶出伏安峰的峰值電流，建立峰值電流與糖類過敏原濃度之間的對應關系。

3.根據權利要求2所述的氧化鋅量子點標記糖類過敏原的溶出伏安測定方法，其特征在于所述芯片為二氧化硅片或玻璃片。