[發明專利]一種養殖或屠宰環境中甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定方法

無效

• 申請號: 201110363771.3
• 申請日: 2011-11-15
• 公開（公告）號: CN102520078A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 蔣原;薛峰;丁濤;張睿
• 申請（專利權）人: 江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心;江蘇中測檢測服務有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N27/62;G01N30/06;G01N1/28
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 王荷英

技術領域

本發明涉及一種養殖或屠宰環境中甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定方法，具體是對牛、羊、豬、雞、魚或蝦的養殖或屠宰環境的土壤和水體中甲砜霉素和氟苯尼考藥物殘留量的測定。

背景技術

目前，甲砜霉素和氟苯尼考這兩類抗生素因在家畜、水產，特別是牛、羊、豬、雞、魚或蝦養殖過程中不規范使用甚至大量濫用，不可避免地在相應的養殖環境和屠宰環境的土壤或水體中存在藥物殘留。甲砜霉素和氟苯尼考在環境中的殘留首先會破壞生態環境，其次在環境中殘留后，經與微生物作用后，環境中易產生耐藥菌株，從而加速了動物自身對甲砜霉素和氟苯尼考的耐藥性，進而又影響了甲砜霉素和氟苯尼考的用量，形成惡性循環。為確保環境水和土壤的安全性，需針對水體和土壤的藥物殘留進行檢測，但目前甲砜霉素和氟苯尼考殘留檢測法主要都是針對動物源性食品本身，如肌肉組織等，尚沒有適合水或土壤中藥物殘留的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可有效地檢測牛、羊、豬、雞、魚和蝦養殖和屠宰環境中甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的分析檢測方法，本方法對樣品的前處理過程快速簡便，檢測結果可靠靈敏。

本發明方法包括以下步驟：

(1)樣本水直接加到平衡好的免疫親和柱(IAC)柱，或土壤樣本加甲醇混勻，離心，上清液加PBS混合后加入IAC柱，自然流出，依次用PBS液、水洗滌柱子，最后用甲醇洗脫，收集洗脫液，用氮氣吹干洗脫液，再用甲醇復溶，過0.22μm有機微孔濾膜；

(2)用液相-質譜/質譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；

(3)將測得的色譜峰與各已知藥物的標準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體品種。

本發明用免疫親和柱對水或土壤樣品進行前處理，再以高效液相色譜與質譜的聯用的方法測定養殖或屠宰環境中甲砜霉素和氟苯尼考殘留量。樣品前處理過程快速簡便，處理后的樣品檢測結果可靠靈敏。

具體實施方式

(1)標準溶液的配制

甲砜霉素和氟苯尼考標準品用體積濃度為30％的甲醇溶液配制成濃度為1mg/mL的標準儲備溶液，4℃保存；再用甲醇溶液逐級稀釋成濃度梯度為1μg/mL的系列標準工作溶液。

(2)樣品前處理

A.土壤樣本前處理

取土壤樣本2±0.01g，加甲醇6mL混勻，離心取上清液，與25mL?PBS混合，加至免疫親和柱(IAC柱)，自然流出，依次用10mL?PBS液、30mL水洗滌柱子，最后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液用氮氣吹干。用1mL的甲醇復溶，過0.22μm有機微孔濾膜。

B.水樣本前處理

取20mL樣本水，直接加到平衡好的IAC柱上，自然流出，依次用10mL?PBS緩沖液和20mL超純水洗滌柱子，最后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液，并用氮氣吹干，加體積濃度20％的甲醇溶液定容至1.0mL，過0.22μm有機微孔濾膜。進HPLC-MS/MS儀測定。

(3)液相-質譜/質譜測定

前處理后的樣品，進液相-質譜/質譜儀(HPLC-MS/MS)測定。

HPLC-MS/MS儀器參數與測定條件如下：

A.梯度洗脫程序如表1：

表1

B.質譜條件如下：

離子源：電噴霧離子源(ESI)；

掃描方式：負離子掃描；

檢測方式：多反應監測(MRM)；

電噴霧毛細管電壓：2.8kV；

去溶劑溫度：350℃；

反吹氣流量：25L?hr-1；

去溶劑氣流量：450L?hr-1；

倍增器電壓：650V；

碰撞氣壓力(Ar)：2×10-3mbar；

C.定性離子和定量離子的選擇質譜條件如表2：

表2

定性依據：陽性樣品保留時間與標準相比±5％以內。

D.基峰與次強離子碎片豐度比標準表3：

表3

定量依據：外標法定量，定量離子采用豐度最大的二級碎片。

進樣之前色譜柱至少平衡15min，重復進標準溶液，當峰面積變化達±10％以內，保留時間達±5％以內時，開始進樣。

E、計算結果

外標法定量

用色譜數據處理機或按下列公式計算：