[發明專利]一種大黃魚干擾素（IFN）基因及其克隆方法

無效

• 申請號: 201110363640.5
• 申請日: 2011-11-16
• 公開（公告）號: CN102559695A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 姚翠鸞;李嬋;王志勇
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C12N15/20
• 分類號: C12N15/20;C12N15/10
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 朱凌

1.一種大黃魚干擾素基因，其特征在于：其蛋白編碼區的cDNA序列，具有序列表中SEQ?ID?NO.1堿基序列及SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。

2.一種如權利要求1所述的大黃魚干擾素基因的克隆方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)?從大黃魚的肝臟和皮膚組織中提取總RNA；

(2)?然后進行cDNA第一鏈合成；

(3)?根據硬骨魚類IFN的同源片段序列設計引物進行嵌套聚合酶鏈式PCR反應，得到大黃魚IFN基因片段，其中正向引物F1：5’?ATGCTCAACAGGATTTTCT?3’，F2?5’GGCTAATAACTCCACTAAC?3’，反向引物R1：5’TCAGCTCCCAGGCTTCAGC?3’,?R2?5’TGTGTTCTCCTCCCATGA?3’；

(4)?又用2條基因特異性正向引物3F1：5’ACAGCCAGGCGTCCAAAG?3’,?3F2：5’?TCAGGTTCTGGAGGAGGC?3’?進行大黃魚IFN?cDNA?3’端快速擴增（3’RACE）；

(5)?然后用2條基因反向引物R1?5’TCAGCTCCCAGGCTTCAGC3’：?R2：5’TGTGTTCTCCTCCCATGA?3’進行對大黃魚IFN?cDNA?5’端克隆（5’RACE）。