[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系特異定量PCR檢測方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110363624.6
• 申請(qǐng)日: 2011-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN102409093A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋君;雷紹榮;郭靈安;尹全;王東;張富麗;劉文娟;常麗娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 成都頂峰專利事務(wù)所(普通合伙) 51224
• 代理人: 成實(shí)

1.轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系特異定量PCR檢測方法，其特征在于，主要包括以下步驟：

（1）合成具有以下核苷酸序列的引物及與引物配合使用的熒光探針，

上游引物序列，Event863-F：5'-CTACTTGTTCGGATGGGTGTTC-3'

下游引物序列，Event863-R：5'-CCTTTATCGCAATGATGGCA-3'

熒光探針序列，Event863-P：5'-FAM-CCCCAAAGTGTACCAAGCTTTCCGAT-TAMRA-3'；

（2）制備MON863品系的DNA稀釋液；

（3）配制PCR反應(yīng)體系；

（4）定量PCR檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系特異定量PCR檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述合成的引物及熒光探針的濃度都為10μmol/l，步驟（2）所述制備的DNA稀釋液的濃度為50ng/μl。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系特異定量PCR檢測方法，其特征在于，步驟（3）所述的配制PCR反應(yīng)體系，即將3μl的DNA稀釋液加入到25μl反應(yīng)體系中，所述25μl的反應(yīng)體系包括以下組分：

Taqman?Master?mix????????????????????????12.5μl

上游引物?????????????????????????????????1μl

下游引物?????????????????????????????????1μl

熒光探針?????????????????????????????????0.5?μl

水???????????????????????????????????????10ul。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系特異定量PCR檢測方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性10min，1個(gè)循環(huán)；95℃變性15s，59℃退火60s，45個(gè)循環(huán)。