[發明專利]廣譜型流感疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201110362666.8
• 申請日: 2010-06-11
• 公開（公告）號: CN102397559A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 李先鐘;張琪;王鑫;孫宇石;劉方杰;胡品良;程虹;楊思儀;闞偉;白先宏
• 申請（專利權）人: 北京精益泰翔技術發展有限公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K39/145;C07K14/11;A61P31/16
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技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，特別是涉及廣譜型流感疫苗及其制備方法。

背景技術

流感是由流感病毒引發的呼吸道傳染性疾病，是到目前為止仍然對人類公共安全帶來巨大威脅的疾病之一，人類歷史上曾出現三次世界性大流感，導致5000萬至1億人死亡，超過兩次世界大戰死亡人數的總和。

流感病毒的主要特點是病毒株變異快、疫情傳播速度快，危害性大。在自然界中，人和其它動物均是流感病毒的宿主，而發生于不同宿主的病毒株重組現象使新的流感病毒株不斷地出現，給人類預防和控制流感疫情帶來嚴峻的挑戰。

到目前為止，預防性流感疫苗是控制流感病毒引發疫情的最佳方式，針對流感病毒變異快、會發生抗原漂移或抗原突變等特點，世界衛生組織在全球建立了流感疫情監控網絡，應用現代流行病學和生物技術手段，分析在下一個流感季節流行的病毒株，并以此為基礎，確定在全球的不同區域的疫苗生產用毒株，用于預防性疫苗的生產。

流感病毒株具有高度變異性，在不同的時間或不同的地點流行的流感病毒株血清型也存在較大的差異，因此，世界衛生組織根據流感病毒流行學調查和預測，不斷更新病毒疫苗株，以預防流感的流行和蔓延。但是流感流行病學調查和預測具有不確定性，而且相對于流感的快速爆發和流行，用流行的病毒株研制生產疫苗有滯后效應等不利因素，因而不能有效地實現對流感的預防和控制。

傳統流感疫苗生產技術路線采用雞胚培養法，而要在短時間內提供大量雞胚、生產出滿足健康人群大規模免疫接種的流感疫苗客觀上存在很大的困難，這種矛盾在大流感爆發期間特別明顯。因此，傳統流感疫苗生產技術不利于在短時間內生產出大量流感疫苗，不能及時的在健康人群中建立有效的免疫屏障，控制流感的大規模流行和蔓延。

因此，研制對不同血清型的流感病毒均有預防保護效果的疫苗——廣譜型流感疫苗成為全球疫苗研究領域的熱點。

在甲型流感病毒粒子和病毒感染的膜上表達了三種類型的跨膜蛋白(Krystyna?Mozdzanowska?et?al，Vaccine.2003(21)：2616-2627)：紅細胞凝集素和神經氨酸酶是分別具有大約510個和420個氨基酸的糖蛋白，相比之下，第三個跨膜蛋白為基質蛋白2(M2)，它包含的胞外結構域(M2e)在人類的流感病毒株中是高度保守的。利用M2對甲型流感病毒感染的廣泛的保護性免疫已有相關研究(Frace?et?al，(1999)Vaccine?17：2237-44；Okuda?et?al，(2001)Vaccine19：3681-91)。

M2是97個氨基酸的非糖基化跨膜蛋白(Lamb?et?al，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA?78：4170-4；Lamb?et?al，(1985)Cell?40：627-33)。它形成同型四聚體，在病毒顆粒的膜上以低密度表達，但在被感染的細胞的質膜上以高密度表達。M2四聚體表現出pH誘導的質子運輸活性，這似乎利于RNP復合物融合后從病毒膜上的釋放，防止紅細胞凝集素在成熟前受酸誘導的構象變化(Steinhauer?et?al，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA?88：11525-9；Pinto?et?al，(1992)Cell?69：517-28)。在23個氨基酸序列的M2e中，N-端的9個氨基酸是完全保守的，在它靠近膜的15個氨基酸的部分中僅顯示出相對低程度的結構多樣性。在人類分離株H1N1，H2N2，H3N2和H5N1亞型中，在7個位置出現了兩個可以相互替換的氨基酸，但這些分離株的大部分實際上具有同樣的序列。

M2e特異性單克隆抗體14C2在體外不能防止病毒感染，但在摻入培養基或瓊脂覆蓋層中時能降低病毒的產量，減小噬菌斑的大小。表明抗體介導的病毒生長限制在體內和體外是通過不同機制進行的。

使用不同類型的疫苗結構和接種形式已經測試了主動誘導的M2特異性免疫的保護效力，原因是能夠導致病毒生長和死亡率的減少。

Merck公司開發出預防流感的化學偶聯物，如US2004/0223976A1和CN1756562A利用流感病毒中高度保守的，具有預防保護效果的抗原片段M2e和HA0蛋白質與載體蛋白OMP偶聯，目前該藥物處于I期臨床階段。

Acambis公司開發出M2e-HBc?VLPs，如US?7361352B2和CN1913920A，同樣利用流感病毒的M2e片段，與乙肝核心抗原通過化學偶聯形成抗流感病毒的嵌合體分子顆粒，目前該藥物也處于I期臨床階段。