[發(fā)明專利]新型脂肪酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110362579.2
• 申請日: 2006-12-08
• 公開（公告）號: CN102382848A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 中尾正宏;金森正樹;深見治一;笠井宏朗;落合美佐
• 申請（專利權(quán)）人: 三得利控股株式會社
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/20;C12P7/64
• 代理公司: 北京信慧永光知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11290
• 代理人: 張淑珍;梁興龍

本申請是申請日為2006年12月8日、發(fā)明名稱為“新型脂肪酶”的、申請?zhí)枮?00680046008.5的專利申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新型脂肪酶。本脂肪酶由Tetrasphaera屬的新株的菌體產(chǎn)生。本脂肪酶可將中鏈脂肪酸及/或長鏈脂肪酸作為底物識別。本脂肪酶可通過陰離子交換樹脂、疏水性樹脂吸附固定，可作為固定化酶使用。本脂肪酶在消化藥、芳香劑制造、臨床檢驗(yàn)試劑、洗滌劑用酶、油脂制造、農(nóng)藥·醫(yī)藥品的光學(xué)活性中間體制造等領(lǐng)域中有利用價(jià)值。

背景技術(shù)

已證明脂肪酶是在各種酯的合成和分解、酯交換、外消旋體的光學(xué)拆分時(shí)優(yōu)異的生物催化劑，實(shí)際上已在消化藥、芳香劑制造、臨床檢驗(yàn)試劑、洗滌劑用酶、油脂制造、農(nóng)藥·醫(yī)藥品的光學(xué)活性中間體制造上使用。

脂肪酶中眾所周知的是動物的胰脂肪酶，而工業(yè)上經(jīng)常使用的是主要來自微生物的脂肪酶。這些脂肪酶的大多數(shù)的基因已被克隆，氨基酸序列也已知(Candida?rugosa：非專利文獻(xiàn)1。Rhizopus?delemar：非專利文獻(xiàn)2。Bacillus?subtilis：非專利文獻(xiàn)3。Staphylococcus?aureus：非專利文獻(xiàn)4。Pseudomonas?aeruginosa：非專利文獻(xiàn)5)。

絲狀菌、芽孢桿菌屬(Bacillus)、葡萄球菌屬(Stapylococcus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)等產(chǎn)生的脂肪酶已在工業(yè)上使用。這些脂肪酶基本上以高級脂肪酸(碳數(shù)為16以上的脂肪酸)作為底物，以短鏈脂肪酸(碳數(shù)6以下)作為底物的是酯酶。可充分識別中鏈脂肪酸，不僅顯示水解活性，還顯示酯化活性的脂肪酶還不為人所知。

中鏈脂肪酸結(jié)合的甘油三酯不僅被胰脂肪酶水解，還被胃脂肪酶水解，在甘油三酯的消化·吸收上也顯示優(yōu)勢(非專利文獻(xiàn)6)。且中鏈脂肪酸被吸收后，在小腸的腸道細(xì)胞中很少再合成甘油三酯，而是從門靜脈運(yùn)送到肝臟，作為能量燃燒。另一方面，高級脂肪酸在腸道細(xì)胞中再合成，由淋巴吸收運(yùn)送到肝臟，有時(shí)作為脂肪積累。即，高級脂肪酸有體內(nèi)積累性，中鏈脂肪酸無積累性。這樣，通過中鏈脂肪酸甘油三酯和通常的食用油脂之間的酯交換來制造有益于健康的油旨。

非專利文獻(xiàn)1?Kawaguchi?et?al.，Nature，341，164-166(1989)

非專利文獻(xiàn)2?Haas?et?al.，Gene，109，107-113(1991)

非專利文獻(xiàn)3?Dartois?et?al.，B.B.A.，1131，253-260(1992)

非專利文獻(xiàn)4?Lee?et?al.，J.Bacteriol.，164，288-293(1985)

非專利文獻(xiàn)5?Wohlfarth?et?al.，J.General?Microbiology，138，1325-1335，(1992)

非專利文獻(xiàn)6?I.Ikeda，Y.Tomari，M.Sugano，S.Watanabe，and?J.Nagata：Lipids，26，369-373(1991)

發(fā)明內(nèi)容

但是，至今為止在工業(yè)上用脂肪酶還未制造出非甘油三酯的中鏈脂肪酸酯。因中鏈脂肪酸無脂肪積累性，所以，用中鏈脂肪酸酯化的食品材料成為不易產(chǎn)生肥胖等問題的材料。

本發(fā)明者對脂肪酶進(jìn)行了銳意研究，且從Tetrasphaera屬新株的菌體培養(yǎng)上清中分離·精制出分子量約為32kDa及約為40kDa的新型脂肪酶，且進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)這些脂肪酶是以中鏈脂肪酸作為底物充分識別的新型物質(zhì)，從而完成了本發(fā)明。

I.新型脂肪酶

本發(fā)明提供如下多核苷酸，其是編碼屬于Tetrasphaera屬(優(yōu)選與Tetrasphaera屬NITE?P-154菌株屬于同種，更優(yōu)選為Tetrasphaera屬NITEP-154菌株)的菌產(chǎn)生的、分子量約為32kDa的脂肪酶的多核苷酸或其同源物，即含有下述(A₁)、(B₁)、(C₁)、(D₁)、(E₁)、(F₁)或(G₁)的多核苷酸：

(A₁)多核苷酸，其由序列號：10中記載的堿基序列的全部或至少包含25～801位的堿基序列的部分組成；