[發(fā)明專利]一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條及其制備和使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110362561.2
• 申請日: 2011-11-16
• 公開（公告）號: CN102507931A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐敦明;黃蓬英;張縉;陳達(dá)捷;陳鷺平;方恩華
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 廈門市誠得知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 35209
• 代理人: 方惠春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥檢測領(lǐng)域，具體涉及一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條及其制備和使用方法。

背景技術(shù)

擬除蟲菊酯類農(nóng)藥因其具有殺蟲譜廣、活性高、用量少、殘留量低等特點(diǎn)而在農(nóng)業(yè)、林業(yè)、衛(wèi)生業(yè)等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。近年來，隨著一批高毒農(nóng)藥的禁用，菊酯類農(nóng)藥在中國的使用量越來越大，其在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留也越來越引起人們的重視。

目前擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量檢測的常規(guī)方法有氣相色譜法和高效液相色譜法等。這些方法的檢測限低、靈敏度高，已有相關(guān)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)可供參考，但樣品前處理復(fù)雜、儀器昂貴、操作技術(shù)要求高，對于中國農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)控中要求的大批量樣品快速初篩工作無法勝任。

免疫分析是一種快速、靈敏的用于痕量檢測的方法，近十年來研究應(yīng)用發(fā)展迅速，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道約有60?多種農(nóng)藥可用于酶免疫分析。由于免疫方法特異性強(qiáng)，多殘留分析就需要采用不同的農(nóng)藥抗體進(jìn)行多次檢測分析，這就增加了檢測成本和工作量，將單種藥劑的檢測研究發(fā)展為對多種類似化合物通用檢測篩選法，測定每類農(nóng)藥的總殘留量，是較為適用的現(xiàn)場篩選檢測方法。

Paulk和Taylor首次將膠體金引入了免疫化學(xué)，建立以膠體金標(biāo)記抗原(或抗體)檢測相應(yīng)抗體(或抗原)的免疫學(xué)新方法，為研制特異、敏感、快速(5～10?min出結(jié)果)和便捷的免疫學(xué)檢測技術(shù)和臨床診斷方法奠定了基礎(chǔ)。經(jīng)過幾十年的發(fā)展，作為一門成熟的技術(shù)被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。

有鑒于此，本發(fā)明人在總結(jié)前人工作的基礎(chǔ)上并根據(jù)大量實(shí)驗(yàn)測試，研發(fā)出一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條，該試紙條對多種菊酯農(nóng)藥均有識(shí)別力，可用于多種菊酯農(nóng)藥的殘留檢測，適合于菊酯農(nóng)藥的初篩，本案由此產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中對于大批量菊酯農(nóng)藥檢測樣品的殘留難以快速檢測初篩的問題，本發(fā)明提供了一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條，可用于菊酯農(nóng)藥檢測樣品的快速檢測和初篩。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條，由如下部分組成：用于附著膜材料的PVC底板，滴加樣品檢測液的樣品墊，附著膠體金標(biāo)記抗體的膠體金墊，用于顯示結(jié)果的測試線和控制線，用于承載測試線和控制線的硝酸纖維素膜和吸水濾紙；膠體金墊上平鋪有菊酯類金標(biāo)抗體，在檢測線和控制線上分別固定有包被抗原和二抗。

上述二抗為羊抗鼠二抗。

本發(fā)明還提供一種如權(quán)利要求1所述的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括如下步驟：

先將菊酯類金標(biāo)抗體噴涂于膠體金墊上，冷凍干燥；再將包被抗原噴涂于硝酸纖維素膜上的測試線位置，在37℃下烘干；最后將二抗噴涂于硝酸纖維素膜上的控制線位置，在37℃下烘干后組裝成條。

本發(fā)明另外提供一種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條的使用方法：

滴加待測樣品后，樣品溶液在毛細(xì)作用下沿著樣品墊向上遷移，移動(dòng)到膠體金墊時(shí)，金標(biāo)抗體將被樣品溶液溶解；當(dāng)樣品中含有待測物時(shí)，待測物將和結(jié)合釋放墊上的金標(biāo)抗體結(jié)合并一同向上遷移，到達(dá)固定有包被抗原的檢測線位置時(shí)，判斷試紙檢測結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)如下：

樣品中含有擬除蟲菊酯類農(nóng)藥：只在對照線上出現(xiàn)一條紅色線；

樣品中不含擬除蟲菊酯類農(nóng)藥：在檢測線和對照線上均顯現(xiàn)一條紅色線；

試紙無效：檢測線和對照線上均不出現(xiàn)紅色線。

本發(fā)明的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥膠體金免疫層析試紙條快速檢測擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的原理如下：

膠體金墊上平鋪有一定量的金標(biāo)抗體，在檢測線和控制線上分別固定有一定量的包被抗原和二抗。滴加樣品后，在各種膜的毛細(xì)作用下，樣品溶液將沿著樣品墊向上遷移，移動(dòng)到膠體金墊時(shí)，金標(biāo)抗體將被樣品溶液溶解。當(dāng)樣品中含有待測物時(shí)，待測物將和結(jié)合釋放墊上的金標(biāo)抗體結(jié)合并一同向上遷移，到達(dá)固定有包被抗原的檢測線位置時(shí)，包被抗原將和待測物競爭結(jié)合金標(biāo)抗體上有限的抗原結(jié)合位點(diǎn)，樣品中待測物含量越高，其競爭力越強(qiáng)，檢測線上的包被抗原和金標(biāo)抗體結(jié)合將越少。當(dāng)包被抗原所結(jié)合的金標(biāo)抗體少于一定的數(shù)量時(shí)，檢測線處將不會(huì)有紅色線條出現(xiàn)。無論樣品是否含有待測物，過量的金標(biāo)抗體或金標(biāo)抗體與待測物的結(jié)合物均將和二抗結(jié)合并被滯留顯色，所以不含待測物(陰性)時(shí)為兩條紅線，含有一定量待測物(陽性)時(shí)只出現(xiàn)一條紅線，而沒有紅線出現(xiàn)則表明試紙條失效。

因此，本發(fā)明的膠體金免疫層析試紙條具有便捷、快速、準(zhǔn)確和無污染等特點(diǎn)，可被廣泛應(yīng)用醫(yī)學(xué)檢測和臨床診斷，成為快速診斷方法。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：