[發明專利]熒光PCR毛細管電泳檢測FLT3-ITD基因突變的試劑盒

無效

• 申請號: 201110361707.1
• 申請日: 2011-11-15
• 公開（公告）號: CN103103251A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 李明;陳嘉昌;陳華云;高云;程鋼;何蘊韶
• 申請（專利權）人: 中山大學達安基因股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及檢測FLT3(Fms-like?tyrosine?kinase?3)基因近膜區的序列內部串聯重復(internal?tandem?duplications，ITD)突變的試劑盒，特別是涉及以熒光PCR毛細管電泳技術檢測臨床樣品中FLT3-ITD的試劑盒。由于本試劑盒對全血或骨髓樣品中的FLT3-ITD的檢測和分析具有很高的靈敏度和特異性，可廣泛應用于白血病判斷預后，指導治療和預測疾病復發等多個領域。

背景技術

FLT3(Fms-like?tyrosine?kinase?3)是III型受體酪氨酸激酶家族中的一員，其突變與白血病的發生密切相關。FLT3與其配體(FL)在造血干/祖細胞的增殖和分化中起重要的調節作用。FL與FLT3的細胞外結構域結合介導一系列細胞內信號傳導途徑，調節細胞增殖和活化。當FLT3發生基因突變時，可導致FLT3非配體依賴性磷酸化，破壞正常血細胞的增殖、分化與凋亡。FLT3突變有兩種形式：一種為發生在FLT3基因近膜區的序列內部串聯重復(internal?tandem?duplications，ITD)，稱為FLT3-ITD突變，ITD的大小和位置都存在多態性，典型的ITD位于第14外顯子，也可累及第14內含子和第15外顯子；一種為發生在酪氨酸激酶結構區域的點突變，稱為FLT3-TKD突變。目前有關于FLT3-ITD突變的研究表明FLT3-ITD突變最常出現在急性髓細胞白血病(acute?myeloid?leukemia，AML)患者中，突變發生率為15％～35％，其次為骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic?syndromes，MDS)，突變發生率約為2％～5％。FLT3-ITD在急性淋巴細胞白血病(ALL)患者中發生率極低(低于1％)，而在慢性髓性白血病(CML)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、多發性骨髓瘤、成人體細胞白血病中尚未發現FLT3-ITD突變。

AML是一組起源于造血干細胞的惡性血液病，具有高度異質性。在影響AML預后危險度的眾多因素中，細胞遺傳學已被認為是最重要的獨立預后因素，一些特異性染色體核型異常，不僅成為AML診斷中的重要標志物，并常被認為是判斷預后的標志。但是大約40％～50％的AML患者未檢測到染色體核型異常，這些患者預后變異較大，5年生存率24％～42％。所以尋找核型正常AML患者的預后分子標志成為人們關注的焦點。隨著分子遺傳學檢測方法的應用，學者們發現正常核型的AML患者在分子學水平上是存在異質性的，包括基因突變或某些特定基因的表達異常，為AML患者的進一步預后分級及分子靶向治療提供了依據FLT3基因突變是已發現的影響AML患者預后的分子標志之一，可作為AML患者預后不良的獨立指標。FLT3-ITD突變是AML患者中最常見的一種突變類型，約15％～35％AML病例存在FLT3-ITD突變，另外還有約7％的AML病例存在FLT3-TKD突變。但是目前大部分研究認為FLT3-TKD突變與AML預后無關，而FLT3-ITD突變與AML發病和發展密切相關，是一個重要的獨立預后因素。FLT3-ITD陽性患者具有較獨特的臨床特征，目前針對于此突變的靶向治療也已經進入不同的臨床試驗階段。而且，不同ITD患者的預后也存在差別，這與ITD-AR(internal?tandem?allelic?ratio，內部串聯重復等位基因比例)值有關，即ITD：WT(FLT3野生型基因)比值，ITD-AR值增加可能導致預后不良，因此ITD-AR值也是AML患者的很強的獨立預后因素。

MDS患者FLT3-ITD突變相比于沒有突變的患者，FLT3-ITD陽性患者轉為AML的概率有增高趨勢，進展為AML的時間有縮短趨勢，且總體生存期縮短，MDS轉為AML后，FLT3-ITD陽性率增高，因此FLT3-ITD是MDS轉化為AML的高危因素，為預后不良因素。

綜上，FLT3-ITD可作為AML和MDS患者預后不良的獨立指標，對FLT3-ITD基因突變進行檢測可以幫助判斷預后，用于指導治療、判斷療效和疾病復發，對增加患者的長期生存率和生存質量有著非常重要的意義。