[發明專利]一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法有效
| 申請號： | 201110361128.7 | 申請日： | 2011-11-15 |
| 公開（公告）號： | CN102433354A | 公開（公告）日： | 2012-05-02 |
| 發明（設計）人： | 喬利仙;丁霄;隋炯明;王晶珊;劉文平 | 申請（專利權）人： | 青島農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12Q1/68;A01H4/00;A01H5/00 |
| 代理公司： | 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101 | 代理人： | 崔濱生 |
| 地址： | 266109 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 將木糖異構酶 基因 用于 花生 遺傳 轉化 篩選 方法 | ||
1.一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于它包括以下步驟：
(1)?將目的基因插入到含木糖異構酶基因xylA的植物表達載體中，構建含有目的基因的重組載體；
(2)?將重組載體轉化花生胚小葉外植體；
(3)?將轉化后胚小葉外植體轉移到添加有蔗糖和木糖的誘導培養基上進行培養，4~5周后誘導出體胚；
(4)?將體胚轉移到添加有蔗糖和木糖的萌發培養基上進行培養，4~5個月后誘導成苗；
(5)?對再生苗進行PCR檢測，獲得轉基因陽性植株；
(6)?將轉基因陽性植株通過嫁接方法移栽田間。
2.根據權利要求?1所述的一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于所述步驟(1)中植物表達載體為pCAMBIA1301-xylA。
3.根據權利要求?1所述的一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于所述步驟(2)中利用農桿菌介導法將重組載體轉化花生胚小葉外植體。
4.根據權利要求?1所述的一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于所述步驟(3)中誘導培養基是含有5g/L蔗糖、10g/L木糖、10mg/L?2,4-D的MS-B5培養基。
5.根據權利要求?1所述的一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于所述步驟(4)中萌發培養基是含有5g/L蔗糖、10g/L木糖、4mg/L?BAP的MS-B5培養基。
6.根據權利要求?4或5所述的一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于所述步驟(3)和(4)中的培養條件為25℃、3000lx、每日光照13h。
7.根據權利要求?1所述的一種將木糖異構酶基因用于花生遺傳轉化的篩選方法，其特征在于所述步驟?(5)中PCR檢測的xylA基因引物為：
上游引物為5ˊ-CTCGAGATGGAGTTCAATATGCAAGCCTA-3ˊ，
下游引物為5ˊ-CTCGAGATTATTTGTCGAACAGATAATGGTTT-3ˊ。
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