[發明專利]大豆轉錄活性蛋白GmPHD6及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201110359375.3
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN103102400A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 陳受宜;張勁松;韋偉;張玉芹;哈達;張萬科;馬彪;林晴
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/11;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種大豆轉錄活性蛋白GmPHD6及其編碼基因與應用。

背景技術

環境中物理、化學因素的變化，例如干旱、鹽堿、低溫等脅迫因素對植物的生長發育具有重要影響，嚴重時會造成農作物大規模減產，因此培育耐逆性高的作物是種植業的主要目標之一。目前，應用基因工程技術進行育種已經成為提高作物耐逆性的重要方法之一。高等植物細胞具有多條途徑應答環境中的各種逆境脅迫，其中轉錄因子起著調控耐逆相關效應基因表達的作用。現已在植物中發現了多類與植物耐逆性相關的轉錄因子，例如：EREBP/AP2中的DREB類，bZIP，MYB等等。PHD(Plant?Homodomain)類具有轉錄活性的蛋白廣泛存在于動植物以及細菌、病毒蛋白中，比如哺乳動物的CBP類蛋白、人的ING1家族、酵母Yng2p蛋白、病毒MIR1蛋白。PHD類蛋白結構域是C4HC3類的鋅指結構，其功能主要為以下幾類：(1)作為乙酰化或去乙酰化酶參與染色質相關的轉錄調控；(2)作為E3泛素連接酶參與蛋白降解；(3)作為PIPs受體感知PIPs信號參與染色質相關的轉錄調控。在擬南芥中首次發現了PHD類蛋白，植物中該類蛋白的功能研究尚少。

大豆是我國五大作物之一，弄清其耐非生物脅迫分子機理，進而為提高其耐逆性提供基礎，具有重要的理論及現實意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種大豆轉錄活性蛋白GmPHD6及其編碼基因與應用。

本發明所提供蛋白，名稱為GmPHD6，來源于大豆屬大豆(Glycine?max(L.))，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物耐逆性相關的由序列2衍生的蛋白質。

其中，序列表中的序列2由248個氨基酸殘基組成。

上述蛋白中，一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

上述蛋白GmPHD6的編碼基因GmPHD6也屬于本發明的保護范圍。

該基因可為如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：

(1)序列表中序列1所示的DNA分子；

(2)在嚴格條件下與(1)限定的DNA序列雜交且編碼植物耐逆性相關蛋白的DNA分子；

(3)與(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且編碼植物耐逆性相關蛋白的DNA分子。

所述嚴格條件可為如下：50℃，在7％十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5M?NaPO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?NaPO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?NaPO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?NaPO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?NaPO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可為：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下雜交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列表中的序列1由747個脫氧核苷酸組成，本序列為GmPHD6基因的讀碼框，編碼具有序列表中序列2的氨基酸殘基序列的蛋白質。

含有本發明基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌均屬于本發明的保護范圍。

上述重組載體具體為將蛋白GmPHD6的編碼基因插入pROK?II載體的Xba?I和Kpn?I識別位點間得到的重組載體；

本發明還保護了擴增上述蛋白GmPHD6的編碼基因全長或其任意片段的引物對。

上述引物對可為擴增GmPHD6的所有引物對，具體可為如下(I)或(II)：