[發(fā)明專利]一種制備麥白霉素的新工藝

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110358920.7
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN103103236A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許荔新;朱睿
• 申請（專利權(quán)）人: 華遠(yuǎn)醫(yī)藥研究院有限公司
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C07H17/08;C07H1/08;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵新技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種微生物生產(chǎn)麥白霉素的方法。

二、背景技術(shù)

麥白霉素屬于大環(huán)內(nèi)酯類多組分抗生素，有效成分主要為麥迪霉素A1和吉他霉素A6兩個(gè)組分，根據(jù)中國藥典2005版要求麥白霉素中麥迪霉素A1的組分不得低于35.0％，中國要求2010版將其要求提高到麥白霉素中麥迪霉素A1的組分不得低于48％，吉他霉素A6的組分不得低于12％。為此，給麥白霉素生產(chǎn)企業(yè)帶來了新的要求。

麥白霉素系生米卡鏈霉菌在代謝過程中產(chǎn)生的16元環(huán)內(nèi)酯抗生素，是臨床上常用的一種廣譜抗菌藥，主要用于耐青霉素的葡萄球菌、鏈球菌和肺炎桿菌等感染的治療。抗菌性能與紅霉素相似，對葡萄球菌、鏈球菌、白喉?xiàng)U菌、肺炎鏈球菌、百日咳桿菌、支原體等有抗菌作用。口服吸收后，廣泛分布于各器官中，以肝、肺、脾中較高，膽汁中有很高濃度，尿中濃度很低，不能透過正常腦膜。可作為紅霉素的替代品，應(yīng)用于敏感菌所致的口咽部、呼吸道、皮膚和軟組織，膽道等部位感染。據(jù)估計(jì)現(xiàn)臨床使用量在20億元人民幣左右。

現(xiàn)階段，麥白霉素原料的生產(chǎn)主要采用微生物發(fā)酵法，但工業(yè)化生產(chǎn)工藝相對國外還比較落后，主要表現(xiàn)為：菌株發(fā)酵濃度低、發(fā)酵、提取工藝成本高、有機(jī)溶劑回收工藝復(fù)雜、能耗高、易造成環(huán)境污染等，難以滿足制劑開發(fā)的需要。針對上述不足，本發(fā)明以生米卡鏈霉菌為出發(fā)菌株，采用秈米粉水解液替代原有的發(fā)酵工藝中的碳源，增加發(fā)酵濃度，同時(shí)選用多烷基醇和烴類混合物替代現(xiàn)有的提取溶劑，降低了麥白霉素的提取成本和溶劑使用量，增加了麥白霉素產(chǎn)品總收率，生物效價(jià)高于中國藥典2010版要求。本發(fā)明解決了現(xiàn)行生產(chǎn)工藝產(chǎn)率低、生產(chǎn)成本高、環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種新穎的麥白霉素制備方式，其中包括新的麥白霉素發(fā)酵培養(yǎng)基和簡潔的麥白霉素提取方式。

通過研究發(fā)現(xiàn)，利用生米卡鏈霉菌(Streptomyces?mycarofaciens)發(fā)酵生產(chǎn)麥迪霉素A1，A2，A3，A4，吉他霉素A6等，其中麥迪霉素A1和吉他霉素A6為麥白霉素的主要有效物，本發(fā)明根據(jù)麥迪霉素A1和吉他霉素A6的合成原理，改變常用的發(fā)酵碳源，提高麥迪霉素A1和吉他霉素A6的含量，同時(shí)，通過改變萃取溶液和萃取方法得到高提取率的麥白霉素。

在本發(fā)明中，利用秈米粉水解液作為碳源，提高了菌絲生長速度，以及麥迪霉素A1和吉他霉素A6的單位發(fā)酵量；發(fā)酵結(jié)束后采用萃取和反萃取的方法，提高了有效物質(zhì)的提取率。

四、具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)一步詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)例中所描述的方法，一般本行業(yè)技術(shù)人員均能讀懂。

實(shí)施例1

種子培養(yǎng)

培養(yǎng)基：秈米粉水解液13％，蔗糖1％，蛋白胨0.2％，硫酸銨0.1％，磷酸二氫鉀0.1％，其余為蒸餾水。

①斜面種子培養(yǎng)

用接種針取保藏的菌株接種于斜面培養(yǎng)基上，于28℃下培養(yǎng)7d。

②一級種子培養(yǎng)液

250mL的搖瓶內(nèi)加入50mL的種子培養(yǎng)基，滅菌冷卻后接一環(huán)生長良好的斜面培養(yǎng)物，于28℃下，200r/min培養(yǎng)48h。

③二級種子培養(yǎng)液

5L的搖瓶內(nèi)加入3L的種子培養(yǎng)基，滅菌冷卻后接入60mL一級種子培養(yǎng)液，于28℃下，200r/min培養(yǎng)48h。

④三級種子培養(yǎng)液

15L的搖瓶內(nèi)加入9L的種子培養(yǎng)基，滅菌冷卻后接入2.7L二級種子培養(yǎng)液，于28℃下，200r/min培養(yǎng)48h。

發(fā)酵培養(yǎng)

發(fā)酵培養(yǎng)基：秈米粉水解液13％，硫酸銨0.1％，磷酸二氫鉀0.1％，碳酸鈣0.05％，其余為蒸餾水。

50L全自動(dòng)發(fā)酵罐內(nèi)加入25L發(fā)酵培養(yǎng)基和適量的消泡劑，0.1MPa下滅菌30min，冷卻至28℃，接入8.0L三級種子培養(yǎng)液，通氣量為0.8-1.0V/V/min，攪拌速度為500-700r/min，發(fā)酵溫度為28℃，發(fā)酵48h后，離心獲得麥白霉素發(fā)酵液。

麥白霉素的提取

①萃取

在萃取罐內(nèi)加入定量的麥白霉素發(fā)酵液，用20％的NaOH溶解調(diào)節(jié)pH值至8.0-9.0，再加入2倍體積的異辛醇和異辛烷(V/V＝4∶1)的萃取溶液，升溫至35-40℃振蕩30min，使之充分混勻，靜置分層，收集有機(jī)溶液部分，獲得麥白霉素的萃取液。

②反萃取