[發明專利]一種菌物孢子萌發載膜及其制作方法

無效

• 申請號: 201110358164.8
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN102492616A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 許文耀;江茂生
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C08J5/18;C08L5/00;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一種菌物孢子萌發載膜及其制備方法。用于食品、糧食、環境微生物檢測、商品檢驗檢疫、藥物、農藥和農業等的菌物孢子萌發試驗。

背景技術

菌物（fungi），原統稱真菌，是一類與人類社會關系密切的真核微生物，既可用來制造藥物、食物、工業原料等，又可引起人、動物、植物的傳染病。菌物孢子萌發試驗是研究菌物的一項常用技術。菌物的種類鑒定，菌種選育、遺傳和變異的研究，生存、繁殖和種群擴散能力，抗逆性，與其他生物之間的相互關系，有害菌物防除技術的研究等，都必須進行孢子萌發試驗。孢子萌發試驗時，一般是用水將孢子配成懸浮液，將孢子懸浮液滴注在透光性好、便于進行顯微鏡下觀察、成分穩定的載物上，再置于試驗設計的條件下進行。常用于孢子萌發試驗的懸浮液載物有：凹玻片、置于皮氏培養皿中或滴注在載玻片上的水瓊脂凝膠平板、滴注在載玻片上的火棉膠載膜。

瓊脂（agar），是一種由紅藻提出的海藻多糖，廣泛用作微生物培養的凝固劑，無臭，味淡，不溶于40?℃以下冷水和無機、有機溶劑中，可溶解于85?℃以上熱水，顯中性反應，放冷至室溫則形成凝膠。在顯微鏡下觀察，瓊脂水凝膠為無色的不規則多角形黏液質片。相較于常用的載玻片，以瓊脂水凝膠作為基質的載膜，能使孢子水懸浮液在面上完全鋪展，兼有一定的保濕功能。單純采用瓊脂水凝膠為載膜，若成批制作，載膜干燥后易破碎，使用不便；若使用前在面積較小的載玻片上直接制作，費料、費時、費工；載膜干、濕狀態下厚度相差5~10倍（視瓊脂含量不同而有差別），使用濕膜因瓊脂水凝膠在玻片上表面張力較大不易制作成達到觀察需要的薄度，太厚則影響透光性；使用干膜則因瓊脂水凝膠攤成薄層至干燥時間長（需要24小時或以上，時間長短因制作處溫度、濕度不同而異），必須使瓊脂水凝膠在載玻片上放置較長時間，管理麻煩，不慎易引起膜破裂或飄進雜物。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種菌物孢子萌發載膜及其制作方法。本發明制作的載膜較薄，不易破碎，孢子懸浮液能方便在其上鋪展成較薄液層，故透光性好不影響菌物孢子萌發狀態的觀察，適宜作為各種菌物孢子配制成懸浮液后進行萌發試驗的懸浮液載物，且制作簡單、使用方便。

本發明的技術方案如下所述：

本發明的一種菌物孢子萌發載膜，其組成物為瓊脂、水溶性無機鹽、吐溫-20、水。

上述組成物的比例按質量百分數計為：瓊脂0.8%~2.0%、水溶性無機鹽1.0%~4.0%、吐溫-20?0.05%~1.0%,余量為水。

組成物中的水溶性無機鹽為鈉鹽、鉀鹽、銨鹽中的一種或多種混合。

所述的菌物孢子萌發載膜的制作方法為，先使組成物中的瓊脂、水溶性無機鹽和吐溫-20完全溶解在85?℃以上熱水中，待混合液降至50-60℃，將其傾注在表面光滑的耐熱平板上，攤成均勻薄層，在室溫下待其凝固后，用刀片切割成方形膜片，自然陰干、保存。

本發明的菌物孢子萌發載膜使用時，先在潔凈的載玻片或相當器皿上滴上一滴水，稍微攤開，取出一張載膜攤在水滴上方。用吸水紙將載膜四周多余的水吸干。將菌物孢子懸浮液滴在載膜上方，并攤成均勻液層，進行孢子萌發試驗。需要觀察孢子萌發試驗結果時，取出載玻片，將載玻片底部的水滴或霧層抹去后，置于顯微鏡下便可觀察。

本發明采用的水溶性無機鹽（water-soluble?inorganic?salts），主要是可溶于水的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽。瓊脂水凝膠中加入適量的水溶性無機鹽，可調節凝膠的酸堿平衡、改善膜制品的柔韌性。

采用的吐溫-20（Tween-20），化學名稱聚氧乙烯山梨糖醇單月桂酸（polyoxyethylene?(20)sorbitan?monolaurate），非離子型表面活性劑，可與水、乙醇、甲醇和乙酸乙酯等混溶，具有良好的助潤濕作用。瓊脂水凝膠中加入適量的吐溫-20，制作過程中使瓊脂液易于擴散成薄層，且可改善膜制品的柔韌性。

本發明人通過一系列的試驗證明，以瓊脂、水溶性無機鹽和吐溫-20為組成物制成的薄膜，較薄（干膜厚度0.2-0.4mm），不易破碎，干膜成品破碎率低于2%、使用過程破碎率低于5%；用作菌物孢子懸浮液萌發的載膜，孢子懸浮液能方便在其上鋪展成較薄液層，可滿足孢子萌發需氧要求高的菌物，孢子萌發整齊，透光性好、不影響菌物孢子萌發狀態的觀察；且具有制作方法簡單、使用方便、制作過程和制成品對操作者和試驗環境安全、易保存（室溫保存于密封容器中的干載膜存放期能超過24個月）等優點。

附圖說明

圖1為番石榴炭疽病菌分生孢子萌發的芽管所產生的附著孢形態。