[發(fā)明專利]一種寡肽C及其抗菌應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110357643.8
• 申請日: 2011-11-12
• 公開（公告）號: CN102382173A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張尚立;張恒;常宏文;王萍;王麗
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗菌肽及其應(yīng)用，尤其涉及一種寡肽C及其抗菌應(yīng)用，屬生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前，因抗菌藥物的泛濫使用，產(chǎn)生了一些新的問題，如出現(xiàn)的相應(yīng)耐藥性致病株，即產(chǎn)生了細(xì)菌的耐藥性，而致病菌的耐藥性已經(jīng)日益嚴(yán)重地威脅著人類的健康和疾病臨床治療。因此，尋找全新類型的抗菌藥物已成為解決耐藥性問題又一對策。

抗菌肽是指分布于生物體內(nèi)具有抵御外界微生物侵害、清除體內(nèi)突變細(xì)胞的一類小分子多肽，根據(jù)肽中氨基酸的數(shù)量的不同，一般將由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四肽、五肽等，一直到九肽；也有文獻(xiàn)把由2～10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽；或稱為短肽。與抗生素不同，抗菌肽是特定基因編碼的產(chǎn)物，它通過破壞細(xì)胞膜通透性使細(xì)胞內(nèi)容物外流，最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡。因此它不會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，因而避免了超級細(xì)菌的產(chǎn)生。

近年來，肽在人體中的作用已引起科學(xué)界的高度重視。隨著醫(yī)學(xué)及生化技術(shù)的發(fā)展，多肽類藥物將成為21世紀(jì)重要的診斷、監(jiān)測、預(yù)防和治療藥。因此，針對日益突出的細(xì)菌的耐藥性問題，開發(fā)具有顯著抑菌活性的寡肽即多肽藥物，具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種寡肽C及其抗菌應(yīng)用。

本發(fā)明所述的寡肽C，其特征在于：寡肽C是SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，具體是：Ala?Val?Leu?Thr?Thr?Gly?Leu。

本發(fā)明所述寡肽C在制備抗細(xì)菌藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的寡肽C具有抑菌功能，同時(shí)對正常細(xì)胞無毒性。

功能實(shí)驗(yàn)顯示：本發(fā)明所述寡肽C對革蘭氏陽性菌抑菌效果略差，對革蘭氏陰性菌(以大腸桿菌為例)抑菌效果明顯，且對真菌的抑制作用也不錯(cuò)，其抑菌效果與革蘭氏陰性菌類似。提示其在抗菌藥物開發(fā)和應(yīng)用方面有重要價(jià)值。

進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)顯示：本發(fā)明的寡肽C對細(xì)菌的抑制作用在30min之內(nèi)就開始發(fā)揮，90min后抑制率即可達(dá)75％以上，120min后就可達(dá)到90％以上。本發(fā)明的寡肽C不僅抗菌作用強(qiáng)，而且穩(wěn)定性好，在100℃煮沸10min后，不僅活性還能保持80％，而且在酸、堿的環(huán)境中還能發(fā)揮其良好的抑菌作用。

本發(fā)明提供的寡肽人工合成方便，且不需任何修飾連接即具有抑菌功能，同時(shí)對正常細(xì)胞無毒性，為抗細(xì)菌藥物的開發(fā)提供了基礎(chǔ)。

鑒于上述寡肽C的性質(zhì)和功能，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以利用分子生物學(xué)技術(shù)，根據(jù)氨基酸與密碼子的對應(yīng)關(guān)系反推出核酸序列作為功能基因，用于制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或植物以表達(dá)功能蛋白，以進(jìn)一步用于藥物的開發(fā)和臨床治療。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

本發(fā)明所述寡肽C的設(shè)計(jì)與合成

1、依據(jù)目前國際主要抗菌肽數(shù)據(jù)庫(http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/；http://aps.unmc.edu/AP/main.php；http://www.bbcm.univ.trieste.it/；http://penbase.immunaqua.com/)中登陸的抗菌肽的序列，分析其一級結(jié)構(gòu)與活性的對應(yīng)關(guān)系，設(shè)計(jì)人工寡肽序列。

2、利用蛋白質(zhì)分析數(shù)據(jù)庫http://www.expasy.org/分析已知活性的多肽序列與設(shè)計(jì)的寡肽序列的二級結(jié)構(gòu)的相似度，結(jié)合其它物理化學(xué)參數(shù)預(yù)測進(jìn)行設(shè)計(jì)序列的修正。

3、將設(shè)計(jì)的人工寡肽序列送至生物公司合成或利用自動(dòng)多肽合成儀合成序列。HPLC檢測純度要大于96％，同時(shí)通過質(zhì)譜檢測確定多肽合成質(zhì)量。樣品以凍干狀態(tài)保存。

4、對合成后的寡肽進(jìn)行抑菌功能檢測篩選。

5、通過功能檢測，最終獲得具有抑菌功能的寡肽序列，命名為寡肽C，其氨基酸序列具體是：Ala?Val?Leu?Thr?Thr?Gly?Leu。

實(shí)施例2

利用液體生長抑制法檢測本發(fā)明所述寡肽C的抑菌活性

2.1材料、試劑

1)本發(fā)明所述寡肽C由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，氨芐青霉素(Amp)為solarbio公司產(chǎn)品，一次性濾器，為美國PALL公司產(chǎn)品，其它藥品試劑為國產(chǎn)分析純。