[發明專利]一種寡肽D及其抗菌應用

無效

• 申請號: 201110357638.7
• 申請日: 2011-11-12
• 公開（公告）號: CN102367265A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 張尚立;張恒;常宏文;王萍;王麗
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K38/08;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

技術領域

本發明涉及一種抗菌肽及其應用，尤其涉及一種寡肽D及其抗菌應用，屬生物醫學技術領域。

背景技術

目前，因抗菌藥物的泛濫使用，產生了一些新的問題，如出現的相應耐藥性致病株，即產生了細菌的耐藥性，而致病菌的耐藥性已經日益嚴重地威脅著人類的健康和疾病臨床治療。因此，尋找全新類型的抗菌藥物已成為解決耐藥性問題又一對策。

抗菌肽是指分布于生物體內具有抵御外界微生物侵害、清除體內突變細胞的一類小分子多肽，根據肽中氨基酸的數量的不同，一般將由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四肽、五肽等，一直到九肽；也有文獻把由2～10個氨基酸組成的肽稱為寡肽；或稱為短肽。與抗生素不同，抗菌肽是特定基因編碼的產物，它通過破壞細胞膜通透性使細胞內容物外流，最終導致細菌死亡。因此它不會使細菌產生抗藥性，因而避免了超級細菌的產生。

近年來，肽在人體中的作用已引起科學界的高度重視。隨著醫學及生化技術的發展，多肽類藥物將成為21世紀重要的診斷、監測、預防和治療藥。因此，針對日益突出的細菌的耐藥性問題，開發具有顯著抑菌活性的寡肽即多肽藥物，具有重要意義。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明要解決的問題是提供一種寡肽D及其抗菌應用。

本發明所述的寡肽D，其特征在于：寡肽D是SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，具體是：Gly?Ala?Val?Leu?Lys?Val?Leu?Lys。

本發明所述寡肽D在制備抗細菌藥物中的應用。

本發明提供的寡肽D具有顯著的抑菌功能，同時對正常細胞無毒性。

功能實驗顯示：本發明所述寡肽D抗菌譜廣，對革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌抑菌效果明顯，且對真菌的抑制作用也很顯著，其抑菌效果與革蘭氏陰性菌類似。提示其在抗菌藥物開發和應用方面有重要價值。

進一步的功能實驗顯示：本發明的寡肽D對細菌的抑制作用在20min之內就開始發揮，45min后抑制率即可達75％以上，90min后就可達到90％以上。本發明的寡肽D不僅抗菌作用強，而且穩定性好，在100℃煮沸10min后，不僅活性還能保持80％，而且在酸、堿的環境中還能發揮其良好的抑菌作用。

本發明提供的寡肽D合成方便，且不需任何修飾連接即具有抑菌功能，同時對正常細胞無毒性，為抗細菌藥物的開發提供了基礎。

鑒于上述寡肽D的性質和功能，本領域普通技術人員可以利用分子生物學技術，根據氨基酸與密碼子的對應關系反推出核酸序列作為功能基因，用于制備轉基因動物或植物以表達功能蛋白，以進一步用于藥物的開發和臨床治療。

具體實施方式

實施例1

本發明所述寡肽D的設計與合成

1、依據目前國際主要抗菌肽數據庫(http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/；http://aps.unmc.edu/AP/main.php；http://www.bbcm.univ.trieste.it/；http://penbase.immunaqua.com/)中登陸的抗菌肽的序列，分析其一級結構與活性的對應關系，設計人工寡肽序列。

2、利用蛋白質分析數據庫http://www.expasy.org/分析已知活性的多肽序列與設計的寡肽序列的二級結構的相似度，結合其它物理化學參數預測進行設計序列的修正。

3、將設計的人工寡肽序列送至生物公司合成或利用自動多肽合成儀合成序列。HPLC檢測純度要大于96％，同時通過質譜檢測確定多肽合成質量。樣品以凍干狀態保存。

4、對合成后的寡肽進行抑菌功能檢測篩選。

5、通過功能檢測，最終獲得具有抑菌功能的寡肽序列，命名為寡肽D，其氨基酸序列具體是：Gly?Ala?Val?Leu?Lys?Val?Leu?Lys。

實施例2

利用液體生長抑制法檢測本發明所述寡肽D的抑菌活性

2.1材料、試劑

1)本發明所述寡肽D由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，氨芐青霉素(Amp)為solarbio公司產品，一次性濾器，為美國PALL公司產品，其它藥品試劑為國產分析純。