[發明專利]一種肝癌標志物多抗免疫質譜試劑盒

有效

• 申請號: 201110353728.9
• 申請日: 2011-11-09
• 公開（公告）號: CN102507936A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 魏開華;肖漢族;原劍;孫云波;付海媛;周曉明;楊保安;侯利平;黃亞娟;鄭俊杰;甄蓓;張拓;王東茂
• 申請（專利權）人: 北京正旦國際科技有限責任公司;湖南金健藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種肝癌標志物的多抗免疫質譜檢測試劑盒，其特征在于，包括血清多肽多克隆抗體和緩沖液，所述多克隆抗體固定在固相載體上，所述固相載體為包被蛋白A或蛋白G的瓊脂糖顆粒，所述血清多肽多克隆抗體為抗合成肽6多克隆抗體，所述合成多肽6的全長序列如SEQ?ID?No.1所示。

2.根據權利要求1所述的多抗免疫質譜檢測試劑盒，其特征在于，還含有洗脫液，所述洗脫液選自pH?2.7的0.1mol/l甘氨酸-HCl溶液、含0.1％TFA的70％ACN的混合液、含0.1％TFA的50％ACN的混合液或5％乙酸。

3.根據權利要求1所述的多抗免疫質譜檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為0.01M，pH7.4的PBS緩沖液。

4.根據權利要求1～3任一項所述的多抗免疫質譜檢測試劑盒，其特征在于，所述抗合成肽6多克隆抗體按照如下步驟制備：

1)采用偶聯載體蛋白KLH的合成多肽6作為免疫原，結合弗氏完全佐劑與不完全佐劑免疫大耳白兔；

2)3-4周后耳緣靜脈采血檢測滴度，滴度在1∶50000以上達到取血標準；

3)頸動脈取血，分離出多抗血清；

4)采用親和層析方法純化多克隆抗體。

5.權利要求1～4任一項所述的多抗免疫質譜檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將純化后的所述多克隆抗體與所述固相載體懸浮液混合，所得濃度為0.075μg/μL-0.6μg/μL，在4℃旋轉孵育5分鐘-4小時，放置1-5min沉淀，過濾，用0.01mol/L、pH7.4的PBS緩沖液100-200μL清洗所述固相載體2-5次，得到所述多肽免疫檢測試劑盒。

6.應用權利要求1～4任一項所述的試劑盒分離血清中多肽標志物抗原的方法，其包括如下步驟：

1)取15-25μl固相載體，置于Eppendorf管中，加入1.5μg-24μg多克隆抗體，4℃旋轉混合5分鐘-4小時，放置1-5min，移出上清液，用0.01M、pH7.4PBS緩沖液100-200μL清洗所得固相載體沉淀2-5次；

2)取用10-40μl血清樣品、10-50μL?PBS，與步驟1)清洗后的所述固相載體混合，4℃旋轉混合8-24h；

3)放置1-5min，移出上清液，用100-200μL?PBS清洗沉淀2-5次；最后一次清洗時將其懸浮液移至另一干凈Eppendorf管中；

4)加入10-15μL洗脫液，吸排混合1-5min；

5)離心，取上清液。

7.一種多肽標志物抗原的免疫質譜檢測方法，其特征在于，將根據權利要求6分離的血清中的多肽標志物抗原進行MALDI-TOF-MS檢測。