[發(fā)明專利]一種奧曲肽的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110352635.4
• 申請(qǐng)日: 2011-11-09
• 公開（公告）號(hào): CN103102390A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 谷海濤;趙呈青;顧含華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州華津允上醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 逯長(zhǎng)明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化合物合成領(lǐng)域，特別涉及一種奧曲肽的制備方法。

背景技術(shù)

奧曲肽，化學(xué)名為D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-賴氨酰-L-蘇氨酰-L-半胱氨酰-L-蘇氨醇環(huán)-(2→7)-二硫化物醋酸鹽，為分子內(nèi)含有一個(gè)二硫鍵的環(huán)八肽是天然生長(zhǎng)抑素的類似物，其化學(xué)式為C₄₉H₆₆N₁₀O₁₀S₂，分子量為1019.24，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式如式Ⅰ所示：

奧曲肽的化學(xué)式如式Ⅱ所示：

奧曲肽有多種生理活性，如抑制生長(zhǎng)激素、促甲狀腺素、胃腸道和胰內(nèi)分泌激素的病理性分泌過(guò)多，對(duì)胃酸、胰酶、胰高血糖素和胰島素的分泌也有抑制作用，能降低胃運(yùn)動(dòng)和膽囊排空，抑制膽囊排空，抑制縮膽囊素一胰酶泌素的分泌，減少胰腺分泌，對(duì)胰腺實(shí)質(zhì)細(xì)胞膜有直接保護(hù)作用；奧曲肽還可抑制胃腸蠕動(dòng)，減少內(nèi)臟血流量和降低門脈壓力，減少腸道過(guò)度分泌，并可增強(qiáng)腸道對(duì)水和Na⁺的吸收。臨床可用于治療門脈高壓引起的食管靜脈曲張出血、應(yīng)激性潰瘍及消化道出血、重型胰腺炎、緩解由胃、腸及胰內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤所引起的癥狀、突眼性甲狀腺腫和肢端肥大癥、胃腸道瘺管等。1988年美國(guó)FDA批準(zhǔn)醋酸奧曲肽用于胃腸道分泌類腫瘤和垂體腫瘤及肢端肥大癥的治療；1998年美國(guó)FDA再次批準(zhǔn)醋酸奧曲肽用于肢端肥大癥的治療。

瑞士山德士(Sandoz)公司于1982年首次合成奧曲肽，近些年，研究者不斷提出新的合成方法，以提高奧曲肽的收率和純度。專利CN1355173A中采用3+5片段縮合法，但是片段5的損失率較高；專利US?4395403中采用Boc法合成，2+6片段縮合制備得到線性?shī)W曲肽，但是片段6的損失率較高；專利CN1810829A中采用固相合成法采用Fmoc法合成線性?shī)W曲肽，最后將末端Fmoc基團(tuán)脫掉再裂解得到線性粗肽；專利CN1923849B采用1+7片段縮合法，且(D)Phe-OH采用Boc保護(hù)基保護(hù)，但是奧曲肽的收率較低，純度不高。因此，提供一種收率較高、純度較好的奧曲肽的制備方法，具有現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種奧曲肽的制備方法。該制備方法將二肽與六肽樹脂通過(guò)縮合制得線性八肽，溶于過(guò)量的N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中，加入氧化劑環(huán)化、純化后制得奧曲肽，提高了奧曲肽的收率及純度。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

一種奧曲肽的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：獲得氨基酸序列為D-Phe-Cys的二肽；

以樹脂為載體，按照固相法合成六肽樹脂；所述六肽樹脂中氨基酸殘基序列為Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr；

在堿性條件下，取所述二肽與所述六肽樹脂發(fā)生縮合反應(yīng)，切肽制得線性八肽；所述線性八肽的氨基酸殘基序列為D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr；

步驟2：取所述線性八肽溶于過(guò)量的N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中，調(diào)整pH值為6.8～8.0，加入過(guò)量的氧化劑，在18～30℃環(huán)化2～3h，調(diào)整pH值為3.5～5.0，純化后，制得結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示的奧曲肽；

其中，Thr-ol是蘇氨醇，Cys是半胱氨酸，Thr是蘇氨酸，Lys是賴氨酸，D-Trp是D型色氨酸，Phe是苯丙氨酸，D-Phe是D型苯丙氨酸。

本發(fā)明提供的奧曲肽的制備方法中，所述環(huán)化具體可以為：

取所述線性八肽溶于體積分?jǐn)?shù)為50～90％的DMF水溶液中，線性八肽在DMF水溶液中的濃度優(yōu)選為為15～30mmol/L，調(diào)整pH值至6.8～8.0，優(yōu)選用稀釋5倍的氨水調(diào)節(jié)pH值，再加入過(guò)量的氧化劑，優(yōu)選為稀釋5倍的雙氧水，氧化劑與線性八肽的摩爾比為5～10∶1，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2～3h，HPLC監(jiān)測(cè)環(huán)化完全后，調(diào)整溶液pH值至3.5～5.0，優(yōu)選為使用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值，反應(yīng)結(jié)束得到奧曲肽粗肽溶液；

作為優(yōu)選，步驟2中所述N，N-二甲基甲酰胺的水溶液中N，N-二甲基甲酰胺的體積分?jǐn)?shù)為50～90％。

優(yōu)選地，步驟2中以mmol/L計(jì)，所述線性八肽與所述N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的水溶液的摩爾體積比為15～30∶1。

作為優(yōu)選，步驟2中所述氧化劑為過(guò)氧化氫或碘乙醇溶液中的一種或兩者的混合物。