[發明專利]一種化合物及其在磺胺類藥物檢測中的應用

無效

• 申請號: 201110351927.6
• 申請日: 2011-11-09
• 公開（公告）號: CN102516199A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 任發政;曹亢;曹雪;姜鷺;郭慧媛
• 申請（專利權）人: 任發政
• 主分類號: C07D277/52
• 分類號: C07D277/52;C07K14/765;C07K14/435;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/577
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技術領域

本發明屬免疫檢測領域，具體涉及一種可用作磺胺類藥物檢測的半抗原的化合物及其在磺胺類藥物檢測中的應用。?

背景技術

磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)是人工合成的抗微生物藥，它主要通過干擾細菌酶系統對對氨基苯甲酸(PABA)的利用，影響細胞核蛋白質的合成，從而抑制細菌的繁殖。SAs與抗菌增效劑聯用后，抗菌譜擴大、抗菌活性大大增強，因此，磺胺類藥物在獸醫臨床上廣泛用于預防和治療畜禽疾病。但因磺胺類藥物殘留而產生的副作用仍不可忽視。多種磺胺類藥物都易被腸道吸收且在體內代謝較慢，因此短時間大劑量或長時間小劑量的刺激可分別引起急性或慢性中毒，影響機體的免疫、泌尿系統，破壞肝臟、腎臟、眼等器官以及甲狀腺等組織，可引起人畜肝硬化、貧血、過敏、甲狀腺癌等疾病。另外，人體內長期存在磺胺會導致許多細菌對磺胺類藥物產生抗藥性。我國采用食品中獸藥殘留法典委員會(CCRVDF，Codex?Committee?on?Residuesof?Veterinary?Drugs?in?Foods，)的限量標準，規定在動物性食品中磺胺類藥物的最高殘留限量為100μg/kg。?

我國現在檢測磺胺類藥物的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜一質譜法(LC-MS)、毛細管區帶電泳法(CE)、免疫分析法(IA)等。常規色譜法結果雖準確、靈敏，但檢測時間長、耗資大、對人員要求高，不適合大量樣品的基層篩選測定。免疫法檢測從上個世紀八、九十年代以來國內外學者進行了大量的研究。實踐表明，免疫分析法檢測具有快速、靈敏、特異性好的優點，適合大批樣品的篩選檢測，其中酶聯免疫檢測法作為一種磺胺類藥物殘留檢測的方法已被使用，但特異性不甚理想，均只能檢測磺胺類藥物中的幾種。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種具有特異性高的檢測磺胺類藥物的方法。?

為了實現該目的，本發明提供了一種可用作磺胺類藥物半抗原的化合物，該化合物如式(1)所示。?

本發明還提供了該化合物的制備方法，該方法包括以下步驟：?

(1)將2-氨基-4噻唑乙酸乙酯與N-乙酰氨基苯磺酰氯在無水吡啶中在110℃攪拌回流1-10小時；?

(2)用乙酸乙酯萃取步驟(1)得到的產物，合并上層溶液并干燥；?

(3)將步驟(2)得到的與2MNaOH溶液在110℃攪拌回流1-10小時；?

(4)將步驟(3)得到的產物的pH值調至4-5，用乙酸乙酯萃取，合并上層溶液并干燥。?

本發明提供了一種磺胺類藥物抗原，其特征在于，該抗原是所述化合物與載體蛋白通過碳二亞胺或混合酸酐法偶聯得到的。?

所述載體蛋白可以為牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、人血清白蛋白、兔血清蛋白、雞卵清白蛋白、血藍蛋白或甲狀腺蛋白。?

本發明提供了一種表面固定有磺胺類藥物抗原的納米金磁微粒混懸液，其特征在于，所述抗原為本發明提供的抗原。?

本發明提供了一種磺胺類藥物抗體，其是由本發明提供的抗原制備，由雜交瘤細胞株2-G12G8B9B8分泌產生的。?

本發明提供了一種磺胺類藥物多殘留檢測的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括以下成分：?

(1)本發明提供的表面固定有磺胺類藥物抗原的納米金磁微粒混懸液；?

(2)本發明提供的磺胺類藥物單克隆抗體；?

(3)磺胺藥物標準品溶液；?

(4)酶標記物；?

(5)洗滌液；?

(6)抗體稀釋液；?

(7)底物顯色溶液；?

(8)終止液。?

本發明提供了一種檢測磺胺類藥物的方法，其包括如下步驟：?

(1)樣品前處理；?

(2)加樣與反應：在試管中加入50μL權利要求5所述的表面固定有抗原的金磁微粒懸濁液，然后依次加入50μL抗體稀釋液稀釋的含有權利要求6所述的磺胺類藥物單克隆抗體的單抗溶液、100μL樣本或標準品溶液以及100μL抗體稀釋液稀釋的酶標記羊抗鼠抗抗體溶液，混合均勻后置于37℃搖床反應40min；?

(3)磁性分離與洗滌：將試管放在磁性分離器上分離2min，倒去上清液，每管加入洗滌液250μL，充分混勻后，再將試管放在磁性分離器上分離2min，棄去上清液。重復洗滌2次；?

(4)加入底物溶液：每管加入200μL底物溶液，室溫顯色3min；?

(5)終止反應：每管加入50μL終止液，磁性分離2min，取上清用酶標儀450nm處測?吸光值；?

(6)分析檢測結果。?