[發(fā)明專利]一種快速檢測痕量吡蟲啉殘留的試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110347619.6
• 申請日: 2011-11-07
• 公開（公告）號: CN102507930A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石洪波;王自良;張海棠
• 申請（專利權(quán)）人: 石洪波
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 安陽市智浩專利代理事務(wù)所 41116
• 代理人: 張智和

一、技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于免疫化學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及一種快速檢測微量氯化煙堿殺蟲劑吡蟲啉的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。

二、技術(shù)背景：

1978年在瑞士蘇黎世舉行的國際純粹化學(xué)與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會（IUPAC）年會上，Soloway等報(bào)道了一類稱為硝基甲撐殺蟲劑的新化合物，并指出這類化合物中殺蟲活性最高的是硝基噻嗪（Nithiazine），但由于硝基噻嗪分子中的2-硝基亞甲基遇光易分解，致使Nithiazine沒有完全市場化，因此，其未能大范圍服務(wù)于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。20世紀(jì)80年代后期，日本科學(xué)家以Nithiazine為先導(dǎo)結(jié)構(gòu)，通過和硝基胍建立橋偶聯(lián)，引入含氮原子的芳雜環(huán)甲基，作為2-硝基亞甲基-咪唑烷五元環(huán)或六元環(huán)系列的N-取代化合物，再通過雜環(huán)上官能團(tuán)轉(zhuǎn)換，獲得了一系列結(jié)構(gòu)衍生物，通過殺蟲活性測定，發(fā)現(xiàn)活性最高的是硝基亞胺類化合物，該類化合物經(jīng)過在世界各地的大田實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其中的的吡蟲啉（Imidacloprid，IMI）在殺蟲活性、光穩(wěn)定性、低毒性和廣泛使用性等方面表現(xiàn)突出，1991年英國布萊頓作物保護(hù)會議上IMI作為殺蟲劑被首次介紹，當(dāng)年即投入商業(yè)化生產(chǎn)。IMI是新型氯化煙堿類殺蟲劑中的第一個(gè)品種，也是代表品種。目前已成功開發(fā)出的劑型包括可濕性粉劑（WP）、微膠囊劑（GG）、乳油（EC）、可溶性液劑（SL）、可溶性粉劑（SP）五大系列，共計(jì)70余個(gè)產(chǎn)品。目前，含IMI的殺蟲劑產(chǎn)品已在120余個(gè)國家的140余種農(nóng)作物上獲得登記，其應(yīng)用范圍涉及糧食、經(jīng)濟(jì)、果樹、茶葉和蔬菜等60余種作物，防治對象涉及同翅目、鞘翅目和鱗翅目等7個(gè)目50多種害蟲。

IMI以昆蟲煙堿型乙酰膽堿受體（nAchR）為分子靶標(biāo)，IMI與該受體結(jié)合，會造成因IMI刺激引起的神經(jīng)沖動電傳導(dǎo)受阻，導(dǎo)致昆蟲異常興奮、痙攣、身體搖晃至衰竭死亡等中毒癥狀。研究發(fā)現(xiàn)IMI對環(huán)境生物，如蜜蜂、家蠶均有極高的胃毒和觸殺毒性，且其代謝產(chǎn)物去硝基吡蟲啉（Desniero-Imidacloprid，DN-IMI）對蜜蜂也表現(xiàn)為高毒。目前因IMI使用不當(dāng)，造成的大面積蜜蜂、家蠶中毒事件時(shí)有發(fā)生。IMI對水生生物（如魚、蝦、蝌蚪、青蛙）、土壤有益生物（如蚯蚓）雖屬中等毒性，但在一定劑量范圍內(nèi)均顯示出一定程度的遺傳毒性，且其水解產(chǎn)物和光解產(chǎn)物與IMI原藥有類似的生態(tài)效應(yīng)。此外，?IMI除對一些天敵生物表現(xiàn)出直接毒性外，對一些天敵生物還具有明顯的亞致死效應(yīng)。不僅會使其產(chǎn)卵量減少、壽命縮短，而且其功能性反應(yīng)參數(shù)也會顯著改變，即明顯降低其對寄主的搜索能力。尤其值得注意的是，國外學(xué)者近年來報(bào)道了IMI在高等動物體內(nèi)有明顯的慢性蓄積毒性、對人類的遺傳毒性和潛在的影響學(xué)習(xí)和影響記憶的效應(yīng)。

目前關(guān)于IMI殘留的檢測方法主要是儀器方法，包括高效液相色普法（HPLC）、氣相色譜質(zhì)普聯(lián)用法（GC-MS）和液相色譜質(zhì)普聯(lián)用法（LC-MS）等，這些方法雖然表現(xiàn)出檢出靈敏度高和特異性強(qiáng)等優(yōu)勢，但殘留樣本需要經(jīng)過繁瑣費(fèi)時(shí)的預(yù)處理程序（樣品提取和凈化）；同時(shí)這類檢測方法需要大型的專門檢測儀器設(shè)備、專門的實(shí)驗(yàn)室和高水平的專業(yè)技術(shù)人員操作，無法進(jìn)行現(xiàn)場檢測，時(shí)效性差，難以推廣。

殘留物的生物技術(shù)檢測方法主要是酶抑制法（EIA）和酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）。EIA技術(shù)主要是利用農(nóng)藥對膽堿酯酶活性有抑制作用的原理，酶與底物反應(yīng)后，通過比色法測定酶抑制率，來判定農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)。但EIA的應(yīng)用有很大的局限性，存在著只能用來檢測有機(jī)磷酸酯類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥、假陽性或假陰性檢測結(jié)果出現(xiàn)的概率比較大、難以從多殘留樣本中檢測單一農(nóng)藥、不能定性、只能粗略定量等技術(shù)問題。以競爭性酶聯(lián)反應(yīng)為檢測原理的ELISA檢測技術(shù)在以上幾方面則有明顯優(yōu)勢，反應(yīng)結(jié)束后用酶標(biāo)分析儀測相應(yīng)的OD值，OD值越低表示被檢樣本中的殘留樣品含量越高，且節(jié)省時(shí)間、費(fèi)用低，定性和定量同時(shí)進(jìn)行，基于單克隆抗體的ELISA幾乎不會出現(xiàn)假陽性或假陰性現(xiàn)象。但由于ELISA是一種靈敏度很高的檢測方法，不同的操作者往往會出現(xiàn)不同的檢測結(jié)果，所以該方法常常造成人為的誤檢和漏檢。因此，基于ELISA原理物化出來的標(biāo)準(zhǔn)化、程序化檢測產(chǎn)品的研制開發(fā)就顯得尤為必要。目前IMI殘留免疫學(xué)檢測試劑盒的開發(fā)在國內(nèi)尚屬空白，急待研究解決。

三、發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的：研制并開發(fā)出特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作便捷、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的農(nóng)產(chǎn)品中微量IMI殘留快速檢測試劑盒。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：