[發明專利]一種快速篩選水產動物細菌性疾病防治用藥的方法

無效

• 申請號: 201110347592.0
• 申請日: 2011-11-07
• 公開（公告）號: CN102505040A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 曹海鵬;何珊;衛若鵬
• 申請（專利權）人: 山西衛氏魚康實業有限公司;上海海洋大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

技術領域

?本發明涉及動物細菌性疾病防治藥物的篩選，具體是一種快速篩選水產動物細菌性疾病防治用藥的方法。

背景技術

細菌性疾病是由細菌引起的水產動物疾病，是水產養殖中最常見也是危害最大的一類疾病，其在各年病害爆發病例中比例最大，給水產養殖造成的經濟損失最為嚴重。因此，能夠有針對性的、及時準確地使用藥物殺滅病原菌是有效控制水產動物細菌性病害的重要措施。目前，水產動物細菌性疾病防治藥物篩選方法一般先進行病原菌的分離純化后再通過藥敏試驗篩選出敏感性藥物，這個過程一般至少需要4~6天，而市場上銷售的快速篩選試劑盒也因保藏時間短、容易污染而未受到廣大漁民的充分認可。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速篩選水產動物細菌性疾病防治用藥的方法。

本發明提供的一種快速篩選水產動物細菌性疾病防治用藥的方法，包括如下步驟：

1）選取瀕死的患病水產動物，用75％酒精反復擦拭體表后置于無菌操作臺中，取其病灶組織于含營養肉湯的具塞塑料離心管中，于35~37℃、200r/min振蕩12h至具塞塑料離心管中的營養肉湯渾濁；

2）無菌條件下用1mL玻璃移液管吸取0.2?mL具塞塑料離心管中渾濁液體于營養瓊脂平板中，在用消毒的涂布棒在營養瓊脂平板上反復涂布均勻后，再用消毒的鑷子夾取不同藥敏紙片分別貼到營養瓊脂平板上，最后將貼有不同藥敏紙片的營養瓊脂平板于35~37℃培養12~18h后測定抑菌環直徑（mm），并根據杭州天和微生物試劑有限公司的紙片法藥敏試驗抑菌環直徑判定標準，篩選出高度敏感藥物作為防治藥物。

所述的藥敏紙片為：復方新諾明、復合磺胺、氟哌酸、慶大霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、左氟沙星、氨芐青霉素和多粘菌素等的藥敏紙片。

所述的水產動物為草魚、鯽魚、鰱魚或虎紋蛙等。

與現有技術相比本發明能夠及時準確地篩選出水產動物細菌性病害的防治藥物，可提高水產養殖用藥的準確性與時效性。

具體實施方式

實施例1

1.?材料與方法

1.1?實驗材料

具有典型細菌性敗血癥病癥的草魚，采集于上海崇明水產技術推廣站的養殖池中；復方新諾明、復合磺胺、氟哌酸、慶大霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、左氟沙星、氨芐青霉素、多粘菌素等藥敏紙片，購于杭州天和微生物試劑有限公司；具塞塑料離心管、營養肉湯、營養瓊脂平板，購于國藥集團化學試劑有限公司；含營養肉湯的具塞塑料離心管，將營養肉湯分裝于50?mL具塞塑料離心管，20?mL/管，于121℃滅菌20min，4℃冰箱保存備用；1mL玻璃移液管，于121℃滅菌20min備用。

1.2?防治藥物的快速篩選方法

1.2.1?解剖用具的消毒

實驗用剪刀、鑷子、解剖盤、涂布棒等均用75％酒精反復擦拭消毒，于無菌操作臺中紫外照射備用

1.2.2?病灶組織的選取與溫控振蕩

選取瀕死的患病草魚，用75％酒精反復擦拭體表后在無菌操作臺中進行常規無菌操作，取其病灶組織于含營養肉湯的具塞塑料離心管中，于35~37℃、200r/min振蕩12h至具塞塑料離心管中的營養肉湯渾濁。

1.2.3?防治藥物的篩選

無菌條件下用1mL玻璃移液管吸取0.2?mL具塞塑料離心管中渾濁液體于營養瓊脂平板中，在用消毒的涂布棒在營養瓊脂平板上反復涂布均勻后，再用消毒的鑷子夾取各藥敏紙片貼到營養瓊脂平板上，最后將貼有藥敏紙片的營養瓊脂平板于35~37℃培養12~18h后測定抑菌環直徑（mm），并根據杭州天和微生物試劑有限公司的紙片法藥敏試驗抑菌環直徑判定標準，篩選出高度敏感藥物作為防治藥物。

2?實驗結果

實驗結果見表1。實驗結果表明，各藥物在營養瓊脂平板上產生的抑菌環直徑大小依次為復方新諾明>慶大霉素>復合磺胺>氟哌酸>恩諾沙星>左氟沙星、多粘菌素>氧氟沙星>氨芐青霉素。根據紙片法藥敏試驗抑菌環直徑判定標準，確定復方新諾明、慶大霉素、多粘菌素為高敏藥物，為草魚細菌性敗血癥的首選防治藥物。

表1?不同藥物在營養瓊脂平板上產生的抑菌環直徑及其敏感程度