[發明專利]一種噬菌蛭弧菌粉有效活菌含量的計數方法

有效

• 申請號: 201110347334.2
• 申請日: 2011-11-07
• 公開（公告）號: CN102352405A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 曹海鵬;何珊;衛若鵬
• 申請（專利權）人: 山西衛氏魚康實業有限公司;山西省生物獸藥飼料工程技術研究中心(有限公司)
• 主分類號: C12Q1/08
• 分類號: C12Q1/08;C12R1/63
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

1.一種噬菌蛭弧菌粉有效活菌含量的計數方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)樣品的制備：無菌操作隨機稱取噬菌蛭弧菌粉1g，加入盛有9mL?10倍稀釋的無菌營養肉湯的50mL具塞離心管中，于漩渦振蕩儀上振蕩混勻制成1∶10的稀釋母液，共設3個平行樣；

2)樣品的稀釋：取3個平行樣，分別進行如下處理：無菌操作用1mL玻璃移液管吸取1mL?1∶10的稀釋母液，加入盛有9mL?10倍稀釋的無菌營養肉湯的50mL具塞離心管中，混勻成1∶10²的稀釋液，這樣依次稀釋，分別得到1∶10³、1∶10⁴、1∶10⁵、1∶10⁶、1∶10⁷、1∶10⁸、1∶10⁹等稀釋度的稀釋液，每次稀釋時必須更換1mL玻璃移液管；

3)培養：將1∶10的稀釋母液以及1∶10²、1∶10³、1∶10⁴、1∶10⁵、1∶10⁶、1∶10⁷、1∶10⁸、1∶10⁹等的稀釋液置于轉速為200r/min、溫度為35～37℃的溫控搖床中，培養24～32h；以盛有9mL?10倍稀釋的無菌營養肉湯的50mL具塞離心管作為對照；

4)測定：以盛有9mL?10倍稀釋的無菌營養肉湯的50mL具塞離心管作為對照，無菌操作用1mL玻璃移液管分別吸取0.1mL孵育24～32h變渾濁的各稀釋液與大腸桿菌菌懸液同時加入0.6％自來水軟瓊脂(65℃溫育)中，待凝固后置于30℃生化培養箱中恒溫培養48～72h，觀察有無噬菌斑的產生；將觀察有噬菌斑產生、且變渾濁的稀釋液所對應的稀釋度的倒數即為噬菌蛭弧菌粉的活菌含量。?