[發(fā)明專利]一種心肌細(xì)胞的中藥保存液及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110345947.2
• 申請日: 2011-11-07
• 公開（公告）號: CN103081893A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田杰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京清美聯(lián)創(chuàng)干細(xì)胞科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;A61K35/24;A61P3/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種心肌細(xì)胞保存液及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

心肌梗死后，心肌細(xì)胞永久性丟失。且成熟心肌不可再生，不可能通過分裂增殖來彌補(bǔ)病理性細(xì)胞數(shù)量減少。雖然近來有研究證實(shí)在心肌梗死后梗死區(qū)邊緣有少量心肌細(xì)胞發(fā)生有絲分裂，但這種分裂十分微弱，根本不足以代償有臨床意義的壞死心肌。現(xiàn)有治療手段也無法促使心肌再生。近年來有研究使用細(xì)胞移植至受損心臟替代壞死心肌，修復(fù)心肌結(jié)構(gòu)和功能，該技術(shù)稱之為“心肌再生”或“細(xì)胞心肌成形術(shù)”(cellular?cardiomyoplasty，CCM)。

心肌重塑是梗死后心功能持續(xù)惡化的核心機(jī)制，很多實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞移植能阻止心肌重塑。Mangi等移植攜帶Akt基因的大鼠MSCs，發(fā)現(xiàn)心肌重塑被抑制、心功能改善，移植細(xì)胞占據(jù)80％～90％的瘢痕，有完全正常的收縮和舒張功能。他們認(rèn)為心功能改善機(jī)制是CCM可以抑制心肌內(nèi)炎癥和病理性肥厚、減少膠原沉積。Kudo等。。發(fā)現(xiàn)骨髓干細(xì)胞移植的獲益機(jī)制主要是減少心肌梗死面積和抑制纖維化。Chachques等.結(jié)扎羊兩支冠脈，將骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞(skeletal?myoblasts，SMs)和VEGF注射至梗死中心和周邊，3個月后細(xì)胞移植抑制了左室擴(kuò)大。Olivares等發(fā)現(xiàn)MSCs移植后梗死心臟的心室?guī)缀涡螤畹靡院芎玫谋３帧?/p>

川芎嗪(Ligustrazine)來源于傘形科植物川芎的干燥根莖，為吡嗪類生物堿。川芎辛香行散，溫通血脈，上行頭顛，下走血海，功能活血行氣，祛風(fēng)止痛，被前人譽(yù)為血中之氣藥。現(xiàn)代研究表明川芎嗪有解痙、降低血管阻力和強(qiáng)烈抑制血小板聚集的作用，對已聚集的血小板有解聚作用，能明顯降低全血粘度；還能增加冠脈流量、有改善心肌供氧、降低心肌耗氧的作用，治療缺血性腦血管及冠心病效果良好，還可以治療偏頭痛和重癥肺心病。川芎嗪的分子量為136.20，分子式：C₈H₁₂N₂，

金氏等發(fā)現(xiàn)東川芎能使SOD活性和MDA含量明顯恢復(fù)，證實(shí)了東川芎能夠穩(wěn)定細(xì)胞的膜性結(jié)構(gòu)，抵抗細(xì)胞膜和膜性結(jié)構(gòu)受自由基攻擊，最終達(dá)到清除自由基的目的，對缺氧缺糖心肌起保護(hù)作用。梁氏等在實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川芎嗪預(yù)處理對整體動物缺血再灌注損傷的保護(hù)作用后，用體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞觀察了川芎嗪預(yù)處理對低氧/再給氧損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明川芎嗪預(yù)處理對體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞低氧/再給氧所致?lián)p傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與提高心肌細(xì)胞抗氧化酶活性，清除氧自由基有關(guān)。

目前大多動物實(shí)驗(yàn)和醫(yī)學(xué)研究均取得積極結(jié)果，很多實(shí)驗(yàn)就細(xì)胞移植途徑作出有意義的探索，但符合應(yīng)用要求、安全高效的給入途徑研究甚少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種心肌細(xì)胞保存液及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供的心肌細(xì)胞保存液，含有川芎嗪、N2添加劑、B27添加劑。所述川芎嗪濃度為10^-6mol/L-10^-8mol/L；所述N2添加劑百分濃度為1％(質(zhì)量百分含量)；所述B27添加劑百分濃度為1％(質(zhì)量百分含量)。

本發(fā)明提供的心肌細(xì)胞保存液，是優(yōu)選為是將10^-6mol/L-10^-8mol/L川芎嗪、1％的N2添加劑(質(zhì)量百分含量)、1％的B27添加劑(質(zhì)量百分含量)，添加入9％生理鹽水。

所述川芎嗪可以以液體的形式加入，也可以以干粉的形式加入。

本發(fā)明提供的心肌細(xì)胞保存液用于保存心肌細(xì)胞，在12小時以內(nèi)細(xì)胞存活率為85％以上，甚至達(dá)到95％以上。

所述心肌細(xì)胞保存液可用于保存心肌細(xì)胞，特別是離體的心肌細(xì)胞，優(yōu)選為離體的人心肌細(xì)胞。

本發(fā)明還保護(hù)一種保存心肌細(xì)胞的方法，是將心肌細(xì)胞懸浮于所述心肌細(xì)胞保存液，4-8℃保存12小時以下(如4-6℃保存12小時或6-8℃保存12小時)；所述心肌細(xì)胞和所述心肌細(xì)胞保存液的配比為6×10⁵-7×10⁵個心肌細(xì)胞活細(xì)胞：1mL心肌細(xì)胞保存液(如6×10⁵-6.8×10⁵個心肌細(xì)胞活細(xì)胞：1mL心肌細(xì)胞保存液，或6.8×10⁵-7×10⁵個心肌細(xì)胞活細(xì)胞：1mL心肌細(xì)胞保存液)。所述心肌細(xì)胞可為離體的心肌細(xì)胞，優(yōu)選為離體的人心肌細(xì)胞。