[發明專利]雜色鮑鈣調蛋白cDNA序列無效

申請號：	201110345360.1	申請日：	2011-11-04
公開（公告）號：	CN102382840A	公開（公告）日：	2012-03-21
發明（設計）人：	姜敬哲;王江勇;劉廣鋒;王瑞旋	申請（專利權）人：	中國水產科學研究院南海水產研究所
主分類號：	C12N15/12	分類號：	C12N15/12;C07K14/435
代理公司：	廣州知友專利商標代理有限公司 44104	代理人：	宣國華;馬赟齋
地址：	510300 廣東***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	雜色鮑鈣調蛋白 cdna 序列
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及分子生物學及功能基因應用相關領域，尤其是涉及雜色鮑鈣調蛋白cDNA序列。

背景技術

鈣調蛋白（Calmodulin）是一種存在于幾乎所有的真核細胞中的鈣結合蛋白。它與Ca²⁺結合后可以進一步結合多種目標蛋白，從而調節包括炎癥反應、代謝、細胞凋亡、肌肉收縮、胞內運動、短期和長期記憶、神經生長及免疫反應等多種生理過程。因此，鈣調蛋白屬于細胞信號通路中的上游關鍵基因，其表達量的上調或下降會引起下游信號途徑中一系列多種多樣的反應和變化。目前，尚未在鮑魚物種中鑒定到鈣調蛋白相關基因及產物。

發明內容

本發明的目的是提供一種雜色鮑鈣調蛋白cDNA序列。

本發明以雜色鮑為材料，提取全組織（肌肉和內臟團）的總RNA，進行反轉錄后cDNA。然后對所得的cDNA進行sfiI酶切，分別割膠回收0.5~1和1~3kb之間的片段，并與pDNR-LIB載體連接轉化大腸桿菌DH10B感受態，建立cDNA文庫。通過生物信息學的方法從眾多序列中鑒定到一個與已知鈣調蛋白基因序列相似的序列。根據鑒定得到的基因序列設計特異引物，上游引物：5’-CGAAACATTTCTGTGAAT-3’；下游引物：5’-TGAGGTCATTACATGGAG-3’。以文庫中鈣調蛋白cDNA序列為模板，采用上述特異引物進行PCR擴增得到雜色鮑鈣調蛋白基因序列，其具有鈣調蛋白的保守結構域及活性中心，其四個保守結構域分別位于蛋白序列的16—36、45—72和84—109和118—145區間；第一個保守結構域的活性中心包括：Asp-20、Asp-22、Asn-24和Glu-31；第二個保守結構域的活性中心包括：Asp-56、Asn-58、Asn-60和Glu-67；第三個保守結構域的活性中心包括：Asp-93、Asp-95、Ser-97和Glu-104；第四個保守結構域的活性中心包括：Asp-129、Asn-131、Asp-133和Glu-140。

本發明所得的雜色鮑鈣調蛋白基因序列，其具體DNA核苷酸如下：

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atgtccaatc?tgtcgcagag?ggagaaacag?ctgtacacca?ggttcttcca?ccaggtggac??120

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ctcggcttga?cgcgacaaca?gattgtggac?gtgtttatga?acatggacac?cgacaacaac??240

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tcgtatggtg?agatgaggtg?ggcatttgac?cagatagaca?cagatggcag?cggcctgctt??360

gacgctgatg?agctgaagga?agtgctgctc?aaatgtggac?gttcattgac?gttgtcacaa???420

gtgaagacta?tgattgccaa?agtcgacatc?aacggtgacg?gcaaattgaa?ctttgatgaa??480

tttattactc?tttttggcta?agactacgta?ctccatgtaa?tgacctcagt?tcgacgaacg?????540

tcaaagttga?gtgatggttg?ttcctaacgt?cgtg??????????????????????????574

其相應的氨基酸序列如下：