[發明專利]HIV-1B亞型耐藥突變株及其構建方法和應用

無效

• 申請號: 201110344905.7
• 申請日: 2011-11-04
• 公開（公告）號: CN102392039A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 李韓平;李敬云;耿慶茂;郭偉;鮑作義;李林;劉永健;莊道民;劉思揚;李天一;王曉林
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N7/00;C12Q1/70;C12Q1/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種構建HIV-1B亞型耐藥突變株的方法，是將HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變為纈氨酸，獲得HIV-1B亞型耐藥突變株。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述逆轉錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述將HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變為纈氨酸是通過所述將HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變為g，第1106位核苷酸由c突變為t實現的；所述HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶的編碼基因如序列表的序列2所示。

4.如權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述HIV-1B亞型耐藥突變株對藥物的耐受能力高于所述HIV-1B亞型野生株；所述藥物為AZT、EFV和NVP中的至少一種。

5.如權利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述將HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變為纈氨酸的方法包括如下步驟：

(1)將pNL4.3質粒中的所述HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變為g，第1106位核苷酸由c突變為t，獲得重組質粒pNL4.3_T369V；

(2)將重組質粒pNL4.3_T369V轉染哺乳動物細胞，培養細胞并收獲上清液。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述哺乳動物細胞為293T細胞；所述培養的方法為：37℃培養18-48h。

7.權利要求1至6中任一所述方法獲得的HIV-1B亞型耐藥突變株。

8.權利要求7所述HIV-1B亞型耐藥突變株在篩選抗艾滋病藥物中的應用。

9.一種重組質粒，為將pNL4.3質粒中的HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變為g，第1106位核苷酸由c突變為t，獲得的重組質粒pNL4.3_T369V；所述HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶的編碼基因如序列表的序列2所示。

10.T369V突變在促進HIV-1B亞型野生株的耐藥性中的應用；所述T369V突變為HIV-1B亞型野生株的逆轉錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變為纈氨酸；所述逆轉錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示。