[發(fā)明專(zhuān)利]一種能夠降解石油的醋酸鈣不動(dòng)桿菌的應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110341710.7
• 申請(qǐng)日: 2011-10-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102676418A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳令新;張衛(wèi)衛(wèi);牛宗亮;殷堃;徐冬雪;劉萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;A62D3/02;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及利用微生物進(jìn)行環(huán)境治理領(lǐng)域，具體地說(shuō)一種能夠降解石油的醋酸鈣不動(dòng)桿菌的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

隨著社會(huì)的發(fā)展，人們對(duì)石油的需求量也不斷加大，與此同時(shí)由于各種途徑造成的石油污染也日趨嚴(yán)重。目前，石油及其煉制品在開(kāi)采、煉制、貯運(yùn)和使用過(guò)程中進(jìn)入海洋環(huán)境而造成的污染，已經(jīng)成為世界各國(guó)的一種最為嚴(yán)重的海洋污染。進(jìn)入海洋環(huán)境的石油及其煉制品主要來(lái)自以下途徑：①經(jīng)流域或直接向海洋注入的各種含油的廢水；②海上油船漏油事故和排放；③海底油田開(kāi)采溢漏及井噴事故；④逸入大氣中的石油烴沉降及海底自然溢油等。目前經(jīng)由各種途徑進(jìn)入海洋的石油烴總量約600萬(wàn)噸/年，排入中國(guó)沿海的石油烴總量約10萬(wàn)噸/年。石油污染對(duì)海洋造成的危害主要有以下幾個(gè)方面：?

1)石油中的多環(huán)芳烴類(lèi)的有毒有害物質(zhì)，可以直接對(duì)海洋生物產(chǎn)生毒性；?

2)石油形成的油膜覆蓋海面，減少水氣中氧氣的交換和光照強(qiáng)度，導(dǎo)致水生生物餓死或者缺氧致死；?

3)石油具有較強(qiáng)的黏性，一旦沾染到動(dòng)物體表，就難以處理并對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生毒害，因此，使一些海鳥(niǎo)和海洋脊椎動(dòng)物受害；?

4)石油中含有難降解的持續(xù)有機(jī)污染物和重金屬等，可在海洋環(huán)境中長(zhǎng)期存留并通過(guò)生物體富集，危害漁業(yè)安全和人類(lèi)的健康，飄到海邊陸地的石油還能污染土壤。?

5)石油污染無(wú)疑加劇了近海的荒漠化，加速了某些物種的滅絕。?

微生物可以分解石油等有機(jī)污染物。石油污染物的微生物修復(fù)技術(shù)，是利用微生物的代謝將存在于環(huán)境中的石油污染物降解成二氧化碳和水或轉(zhuǎn)化成為無(wú)害物質(zhì)的工程技術(shù)。早在上個(gè)世紀(jì)80年代，對(duì)石油污染物的微生物修復(fù)技術(shù)就開(kāi)始研究，并逐漸在實(shí)際中應(yīng)用。1989年美國(guó)Exxon公司和美國(guó)環(huán)保局聯(lián)合實(shí)施的微生物修復(fù)Alaska威廉王子海灣石油污染，是應(yīng)用微生物進(jìn)行環(huán)境中石油污染修復(fù)的一個(gè)極為成功的例子，也是現(xiàn)代微生物修復(fù)技術(shù)發(fā)展的開(kāi)端。在石油污染物微生物修復(fù)技術(shù)中，具有石油分解能力的微生物的篩選是利用微生物技術(shù)進(jìn)行石油污染物微生物修復(fù)技術(shù)研發(fā)的前提和工具。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種利用自身代謝能夠降解石油的醋酸?鈣不動(dòng)桿菌及其應(yīng)用。?

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：?

一種能夠降解石油的醋酸鈣不動(dòng)桿菌的應(yīng)用，其特征在于：所述醋酸鈣不動(dòng)桿菌為醋酸鈣不動(dòng)桿菌T32，分類(lèi)學(xué)命名乙酸鈣不動(dòng)桿菌Acinetobacter?calcoaceticus，其可作為石油的降解菌株。該菌于2010年11月06日被中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)登記保藏，編號(hào)為CGMCC?No.4311，保藏單位地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。?

所述醋酸鈣不動(dòng)桿菌能夠利用石油作為唯一的碳源在最小培養(yǎng)基中生長(zhǎng)和繁殖，能夠顯著降解所在環(huán)境中石油的濃度。?

所述醋酸鈣不動(dòng)桿菌T32，可以利用其自身的代謝過(guò)程，降低環(huán)境中石油的濃度，主要包括以下步驟：?

(1)T32種子培養(yǎng)：從平板上選取一環(huán)菌落接入LB培養(yǎng)基，搖瓶裝液量為搖瓶體積的30％，培養(yǎng)溫度為28～30℃，培養(yǎng)轉(zhuǎn)速180～200rpm/min，培養(yǎng)時(shí)間為10-16h。?

(2)T32降解石油的搖瓶實(shí)驗(yàn)：將步驟(1)中的T32種子液按1×10⁷CFU/ml的起始濃度接種于含有石油的最小培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以未接種T32種子液的含有石油的最小培養(yǎng)基作為未被細(xì)菌降解的石油的對(duì)照。?

(3)T32降解96孔板中的石油：稱(chēng)取200mg的石油溶解于2ml的有機(jī)溶劑正己烷中，配置成終濃度為100mg/ml的石油溶液。取100μl的石油溶液加入到無(wú)菌的96孔板中，放置在室溫靜置使正己烷全部揮發(fā)干凈。將過(guò)夜培養(yǎng)的醋酸鈣不動(dòng)桿菌菌液加入到最小培養(yǎng)基中使菌液的終濃度達(dá)到1.0×10⁷CFU/ml。將100μl的上述菌液加入到含有石油的96孔板中，在28～30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。7天后觀察降解結(jié)果，并對(duì)未經(jīng)過(guò)細(xì)菌降解和經(jīng)過(guò)細(xì)菌降解的石油進(jìn)行紫外光吸收值和氣相色譜的測(cè)定。?

步驟(2)中所述最小培養(yǎng)基的配方為：每升水中加入1360mg磷酸二氫鉀，1780mg磷酸氫二鈉，500.08mg硫酸鎂，500mg氯化銨，0.1mg氫氧化鋁，0.05mg二氧化錫，0.05mg碘化鉀，0.05mg氯化鋰，0.05mg硼酸，0.1mg硫酸鋅，0.01mg氯化鈷，0.01mg硫酸鎳，0.05mg氯化鋇和0.05mg鉬酸銨，pH，7.2±0.1。?