[發明專利]一種凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子

有效

• 申請號: 201110341708.X
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102757964A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 相建海;趙翠;郇聘;張曉軍;李富花
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說是凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子。

背景技術

凡納濱對蝦俗稱南美白對蝦，是世界上最重要的三種經濟對蝦之一，也是我國重要的海水養殖種類，目前可占我國對蝦總產量的80％以上。然而，當前凡納濱對蝦的養殖業存在著種質退化、病害頻發的難題，特別是對蝦白班綜合征病毒(WSSV)的大規模爆發嚴重制約了我國凡納濱對蝦養殖業的健康發展。

轉基因是物種種質改良的重要手段，其一般指將人工構建的基因功能元件導入到生物體基因組中，達到改變生物體的性狀的目的。當前，轉基因技術在經濟動植物的性狀改良中表現出了巨大的潛在應用價值，如轉抗病害基因農作物，轉生長因子鮭魚以及可以在乳腺中分泌藥物的轉基因動物(生物反應器)等。轉基因技術在凡納濱對蝦中也有著廣闊的應用前景，如將抗病基因導入對蝦中，產生抗病品系，將有可能從根本上解決當前對蝦養殖業中WSSV頻發的頑疾；將生長因子類的基因導入對蝦中，有希望培育出高產、低生長周期的品系，縮小養殖成本，增加養殖效益。

當前，在凡納濱對蝦中尚無轉基因的應用。除導入及整合方法的限制外，可用基因元件(包括對蝦源啟動子和功能基因)的缺乏也是重要的限制因素之一。啟動子是人工構建轉基因載體的不可或缺的重要組成成份，它決定了所轉入的基因的表達情況，如表達時間、部位、強度等等。熱休克蛋白HSC70是一種重要的生物活性蛋白，參與了生物體內眾多的生理過程。Hsc70基因表達的一個重要特征是呈組成型表達，而在高溫或病原刺激下又能呈上調表達趨勢；而這種表達特征主要取決于hsc70基因的啟動子組成。將hsc70基因的啟動子元件應用于轉基因研究中，可以通過控制溫度的高低方便地調控導入基因的表達量，使生物體的性狀按照人類的意志進行改變，有重要的應用價值。此外，由于該啟動子來自于凡納濱對蝦本身，不存在病毒啟動子可能引起的生物安全問題，安全高效。該專利對凡納濱對蝦hsc70基因啟動子的發現和其功能的闡明與應用，將有助于凡納濱對蝦轉基因育種技術的研究及經濟性狀的改良。

發明內容

本發明目的在于提供一種凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子：凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子為下述任一項：

(1)凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子為序列表中SEQ?ID?NO.1堿基序列；

(2)與序列表中SEQ?ID?NO.1限定的DNA序列具有80％以上同源性的DNA序列；

(3)是序列表中SEQ?ID?NO.1的片段、遺傳變體或缺失體，且能控制下游基因轉錄的DNA分子。

所述啟動子作為啟動海洋生物組織特異性地表達目標基因的啟動子的用途。

所述啟動子與與之進行可操作的有效基因連接，而后插入載體中構成表達載體。所述有效基因包括如免疫相關基因LGBP、hsp70、lectin、toll等，生長相關基因如myostatin、actin、tubulin、EGF等，其它重要生理基因如vasa、SOX、BMP、NOTCH等；載體為表達載體如pCMVp-NEO-BAN、pEGFP、pEGFT-Actin、pSV2、CMV4等。

而后以可表達的方式將有效基因與所述的啟動子連接，得重組片段；將上述重組片段插入載體中；用該載體轉化宿主細胞，培養該細胞表達有效基因。

本發明具有如下優點：

1.本發明獲得凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子，其采用BAC克隆全測序及啟動子預測方法，比傳統的染色體步移方法更簡單快捷。

2.本發明將凡納濱對蝦熱休克蛋白基因啟動子用于轉基因載體構建的優勢在于：

(1)熱休克蛋白hsc70是一種組成型表達的基因，并且其基因啟動子在熱刺激后表現出表達量增加的現象。其在轉基因后即可源源不斷地表達目的基因，而且可以利用熱激法使目的基因有更高水平的表達，從而控制目的基因表達量的高低。另外，熱休克蛋白參與了對蝦體內多種生理過程，必定為一個高效表達的調控元件；用熱休克蛋白基因啟動子構建轉基因載體，所攜帶的外源基因表達效率很可能會大大提高。

(2)在對蝦轉基因實驗中使用對蝦自身啟動子，不會帶入病毒等其他生物的核酸序列，具有更高的生物安全性，有利于將來轉基因對蝦進入市場。

3.本發明使用EGFP基因為報告基因構建轉基因載體的優點在于EGFP是加強型綠色熒光蛋白，容易觀察和檢測，能極大地提高轉基因動物的篩選效率，有利于對蝦轉基因技術的建立。

附圖說明