[發明專利]霍亂弧菌毒素基因多重實時熒光定量PCR檢測試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201110341182.5
• 申請日: 2011-11-02
• 公開（公告）號: CN102533967A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 吳方;金大智;顧建忠;張政;王建蘭;羅蕓;蔣逸群;朱海燕;周惠芳
• 申請（專利權）人: 海寧市疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種霍亂弧菌毒素基因多重實時熒光定量PCR檢測試劑盒，主要包括特異性引物和探針以及PCR反應試劑，其特征在于，所述特異性引物和探針由霍亂毒素A亞單位基因(ctxA)、輔助霍亂腸毒素基因(ace)和小帶聯結毒素基因(zot)的特異性引物和探針組成：

ctxA上游引物F1：5′-AAC?GTT?AAT?GAT?GTA?TTA?GGG?GCA?T-3′

ctxA下游引物R1：5′-GTT?ACT?GTAATA?TCT?ATC?TCT?GTA?G-3′

ctxA探針P1：5′(HEX)-ATA?CTC?CCA?AAT?ATA?TGG?ATG?GT-(BHQ1)-3′

ace上游引物F2：5′-GGA?GAT?GTC?CCA?GAAAGT?GAT?TG-3′

ace下游引物R2：5′-CGG?GTC?ATC?AAA?GCC?TGAAG-3′

ace探針P2：5′-(FAM)-TGC?TGC?CTC?CTC?AAT?ACA?GCG?

GCT-(BHQ1)-3′

zot上游引物F3：5′-CAC?CAC?GGC?TGG?GAT?ATC?TG-3′

zot下游引物R3：5′-CTATCT?CCG?CCG?CCT?CTC?T-3′

zot探針P3：5′-(Cal610)-CAC?GCC?TAA?CAT?TGC?CAA?AGT?

GCA-(BHQ2)-3′

其中FAM、HEX和Cal610為不同波長的熒光報告基團，BHQ1和BHQ2為熒光淬滅基團。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括霍亂毒素A亞單位基因(ctxA)、輔助霍亂腸毒素基因(ace)和小帶聯結毒素基因(zot)的標準品，所述標準品序列如下：

ctxA標準品：aacgttaatg?atgtattagg?ggcatacagt?cctcatccag?atgaacaagaagtttctgct?ttaggtggga?ttccatactc?ccaaatatat?ggatggtatc?gagttcatttt?ggggtgcttga?tgaacaatta?catcgtaata?ggggctacag?agatagatat?tacagtaac

ace標準品：ggagatgtcc?cagaaagtga?ttgatatgtt?taccatctat?ccgcttatcc?aacaggctat?cgatatgctg?cctcctcaat?acagcggctt?tctgttcttt?ttagggttag?accaagcgct?ggctatcgtg?cttcaggctt?tgatgacccg

zot標準品：caccacggc?tgggatatct?gcctaaccac?gcctaacattgccaaagtgc?acaacatgat?aagagaggcg?gcggagatag。