[發明專利]一種生血寧片的高效液相色譜指紋圖譜及制備方法和用途

有效

• 申請號: 201110341113.4
• 申請日: 2011-11-02
• 公開（公告）號: CN102507778A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 聶晶;劉朝勝;王根才;羅京
• 申請（專利權）人: 武漢聯合藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術領域

本發明涉及一種中藥生血寧片的高效液相色譜指紋圖譜及其建立方法和用途，屬于中藥領域。

背景技術

生血寧片是武漢聯合藥業有限責任公司獨家生產的一種中成藥，其有效成分來自于中藥蠶砂的提取物，該藥具有益氣補血的功效，可用于治療缺鐵性貧血。生血寧片原有藥品標準是通過薄層法進行定性鑒別，但因該方法專屬性差，無法對藥品質量進行有效監控。

指紋圖譜技術是色譜技術發展的更高階段，被越來越多應用于復雜化學成分的鑒定工作中。在中藥領域，將中藥(或中成藥)提取物經色譜分析后能得到一張色譜圖，雖然目前尚不能說明圖上每個色譜峰的歸屬，但至少可以證明其對應成分的存在，于是由這些色譜峰就構成了被檢中藥的內在質量，由于每一種中藥的內在成分譜是相對固定的，而不同中藥的成分譜又是絕對不同的，因而將被檢樣品指紋圖譜與產品標準指紋圖譜進行比對，即可對被檢產品的真偽或優劣做出評價。

由于中藥成分復雜，且其中的大部分成分還是未知的，這給指紋圖譜技術在中藥鑒別領域的應用造成了一定的困難。加之為產品建立專屬指紋圖譜需要豐富的經驗和創造性勞動，因而除中藥注射劑(成分譜相對簡單)外，在中成藥中使用指紋圖譜的成功案例極為少見。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種生血寧片的高效液相色譜指紋圖譜；本發明的另一目的是提供使用該指紋圖譜鑒定生血寧片的方法。

本發明目的一所述的指紋圖譜是通過以下技術方案得到的：

A、色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以含有20mmol/L四丁基溴化胺的0.2％甲酸溶液為流動相A，以體積比為50∶50∶5的乙腈-甲醇-丙酮混合液為流動相B，梯度洗脫；檢測波長為392nm；

B、供試品溶液的制備：取供試品粉末0.2～0.3g，置于50ml量瓶中，加甲醇適量，密塞，超聲處理10分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得；

C、測定法：精密吸取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，獲得指紋圖譜。

上述技術方案中，在進行梯度洗脫時流動相優選按以下方式混合：

??時間(min)??流動相A??流動相B??0??55％??45％??60??5％??95％??65??5％??95％

如供試品是生血寧片，則按上述技術方案得到的指紋圖譜中應至少有10個特征峰，它們以二氫卟吩e6的吸收峰(5號峰)為參照，得到的相對保留時間依次為：1號峰0.310～0.380，2號峰0.350～0.415，3號峰0.480～0.550，4號峰0.635～0.715，5號峰1.000，6號峰1.065～1.095，7號峰1.225～1.265，8號峰1.430～1.505，9號峰1.535～1.630，10號峰1.610～1.690。

指紋圖譜中的10個特征峰除了相對保留時間符合上述要求外，以二氫卟吩e6的吸收峰面積為參照，各峰的相對峰面積依次應為：1號峰1.24～1.51，2號峰2.35～2.70，3號峰2.33～2.90，4號峰0.39～0.84，5號峰1.00，6號峰0.26～0.43，7號峰0.77～1.43，8號峰0.37～0.69，9號峰0.19～0.36，10號峰0.14～0.32。