[發明專利]肺癌細胞特異靶向多肽、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201110340669.1
• 申請日: 2011-11-02
• 公開（公告）號: CN102382175A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 朱毅敏;董兵
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種癌細胞靶向性多肽及其制備方法和應用，尤其涉及一種對肺癌細胞具有特異靶向性的多肽及其制備方法和應用，屬于生物、醫藥技術領域。

背景技術

肺癌是全球高發腫瘤之一，據統計肺癌已經超過肝癌成為我國首位惡性腫瘤死亡原因，占全部惡性腫瘤死亡的22.7%，且發病率和死亡率仍在繼續迅速上升。現代醫學對肺癌科學研究已經取得了不少進展，但是肺癌的早期診斷和有效治療仍然是診斷治療過程中的難題。如何能提高早期診斷的靈敏度和治療的精準性，成為肺癌治療研究的目標。

近些年出現的分子靶向治療技術以其低劑量、高效率、低毒副反應的特點，逐漸成為癌癥藥物治療的新方向。分子靶向治療指以癌癥相關的特異性分子或者表達異常的分子為靶點，將藥物、抗體等有效成分靶向定位于癌細胞及相關成分并進行清除，從而達到癌癥診斷及治療的目的，而實現該目標的關鍵是要得到特異性的靶向分子。近年來出現的表面展示技術為確定癌細胞表面靶點提供了新的思路。表面展示技術是利用基因工程手段實現外源肽段(或蛋白質結構域)以融合蛋白形式在微生物表面進行展示的新型基因工程技術,被展示的多肽或蛋白可以保持相對獨立的空間結構和生物活性。應用較多的展示技術有噬菌體展示、細菌表面展示、酵母展示和體外的核糖體展示等。細菌表面展示技術結合流式細胞分選技術以快速、高通量的特點成為展示技術領域中應用的熱點，雖然國內外的研究者對肺癌的靶向研究正在不斷深入，但到目前為止國內外尚未見可以特異性靶向肺癌細胞的靶向分子及特異性檢測肺癌細胞方法的報道。

發明內容

本發明的目的之一在于提出一種肺癌細胞特異靶向多肽，以克服現有技術中的不足。

為實現上述發明目的，本發明采用了如下技術方案：

一種肺癌細胞特異靶向多肽，其特征在于：它具有如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列。

本發明的另一目的在于提供一種肺癌細胞特異靶向多肽的制備方法，該方法是通過細菌隨機多肽庫體外展示方法和流式細胞分選方法在人肺癌細胞表面篩選出與人肺癌細胞特異性結合的目標產物。

本發明的又一目的在于提供前述肺癌細胞特異靶向多肽在制備肺癌診斷、跟蹤試劑中的應用。

本發明采用細菌隨機多肽庫體外展示技術和流式細胞分選技術在人肺癌細胞A549細胞表面篩選出與肺癌細胞特異性結合的靶向多肽，經基因測序及體外細胞結合實驗鑒定后，得到與肺癌細胞A549細胞特異性結合的13肽，具有如SEQ?ID?NO.1所示的序列，命名為“A-13A-1肽”。

與現有技術相比，本發明的優點至少在于：該A-13A-1肽可與肺癌細胞A549細胞特異性結合，而對肝癌、乳腺癌、宮頸癌等的腫瘤細胞無特異性結合作用；該A-13A-1肽與正常肺成纖維細胞HLF細胞無特異性結合，顯示出多肽對肺癌腫瘤細胞的特異性選擇。同時，該A-13A-1肽的制備方法簡單易行，適于規模化工業生產。本發明為肺癌的早期診斷、靶向治療等提供了重要的理論和實踐基礎，具有廣闊的應用前景。

附圖說明

圖1a-1g是表達A-13A-1肽細菌與A549細胞、HLF細胞、H460細胞、HeLa細胞、MCF-7細胞、Hep2細胞和HepG2細胞特異性結合能力鑒定結果的細胞實驗流式分析圖，圖中P4代表同細菌結合的細胞的比例；

圖2a-2g是表達A-13A-1肽細菌特異性結合鑒定結果的熒光照片，其中：

圖2a:?表面展示A-13A-1肽的細菌和A549細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)；

圖2b：表面展示CPX的細菌和A549細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)；

圖2b:?表面展示A-13A-1肽的細菌和HLF細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)；

圖2d:?表面展示A-13A-1肽的細菌和H460細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)；

圖2e:?表面展示A-13A-1肽的細菌和HeLa細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)；

圖2f:?表面展示A-13A-1肽的細菌和HepG2細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)；

圖2g:?表面展示A-13A-1肽的細菌和MCF-7細胞孵育后的熒光圖片（綠色熒光代表了細菌）(200×)。

具體實施方式

以下結合附圖及一較佳實施例對本發明的技術方案作進一步的說明。